论文部分内容阅读
目的：为构建肝细胞永生化载体，对猿猴病毒40大T抗原基因(SV40T)外显子进行拼接并以其为外源片段构建逆转录病毒永生化载体pLLTSN．方法：以质粒pUC19-SV40T为模板，高保真PCR扩增SV40T的2个外显子，重叠延伸拼接法将两个外显子拼接到一起，然后用双粘端连接法将其克隆到空载体pLXSN的EcoR I和BamH I位点之间，通过菌落PCR和酶切法筛选，鉴定阳性克隆并经DNA测序验证．结果：拼接成2．1kb的SV40T，用菌落PCR和酶切法随机筛选的10个菌落中4个为阳性，均含有2．1kb S