【摘 要】
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目的 探索与视网膜母细胞瘤(RB)发生发展相关的关键基因.方法 从GEO数据库中下载3个RB基因表达谱芯片数据集,合并后用R软件sva包消除批次效应、limma包分析RB的差异表达基因(DEGs)、clusterProfiler包对DEGs进行GO富集和KEGG通路分析,采用STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白相互作用(PPI)网络并利用cytoHubba寻找网络核心基因;对加权基因共表达网络(WGCNA)进行分析,将基因划分模块与临床信息进行关联以找到关键模块,进一步寻找关键模块中的关键基
【机 构】
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重庆医科大学附属第二医院眼科/眼科学重庆市市级重点实验室,重庆 400010
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目的 探索与视网膜母细胞瘤(RB)发生发展相关的关键基因.方法 从GEO数据库中下载3个RB基因表达谱芯片数据集,合并后用R软件sva包消除批次效应、limma包分析RB的差异表达基因(DEGs)、clusterProfiler包对DEGs进行GO富集和KEGG通路分析,采用STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白相互作用(PPI)网络并利用cytoHubba寻找网络核心基因;对加权基因共表达网络(WGCNA)进行分析,将基因划分模块与临床信息进行关联以找到关键模块,进一步寻找关键模块中的关键基因.体外培养Y79、WERI-RB-1和ARPE-19细胞,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测5个关键基因的mRNA表达量;收集20例RB组织样本,利用免疫组化技术检测关键蛋白的表达情况.结果 共得到1254个DEGs,其中表达上调基因422个,表达下调基因832个.GO富集分析结果显示,DEGs主要与蛋白质异二聚体活性、阳离子跨膜转运蛋白活性、染色质结合等生物学功能相关;KEGG通路分析结果显示,DEGs主要富集在细胞周期、光传导、DNA复制等通路.共得到79个位于PPI网络中的核心基因.WGCNA分析将DEGS划分为11个共表达基因模块,根据各个模块与临床性状之间的Pearson相关系数筛选出blue、pink、turquoise、red和brown共5个重要模块,其中blue模块与诊断年龄的相关系数最高(r=0.65),综合分析后得到染色体结构维持蛋白4(smc4)、微小染色体维持蛋白6(mcm6)、着丝粒蛋白K(cenpk)、驱动蛋白家族成员15(kif15)、胞质分裂蛋白调控因子-1(prc1)等5个关键基因.qRT-PCR验证结果表明,prc1、cenpk基因在Y79、WERI-RB-1细胞中的相对表达量明显高于ARPE-19细胞(P<0.05);免疫组化检测结果显示,PRC1蛋白在RB组织样本中的表达量明显高于正常视网膜组织(P<0.05).结论 与RB发生相关的关键基因包括smc4、mcm6、cenpk、kif15、prc1等;PRC1蛋白在RB中表达量增高,可能对RB的发生发展具有重要影响.
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古代医籍中有关“护场”的记载,原用于描述疔疮的临床表现以及判断病情预后转归的吉恶,应用范围较为局限.目前,护场理论广泛应用于臁疮、褥疮、肿瘤、糖尿病足等疾病的治疗中.治法包括外治法和内治法,其中外治法包括中药外用、负压疗法、物理疗法、红光疗法、熏灸法、清创法、银离子敷料疗法等;内治法通过扶助正气,祛除邪气,以促使体内大护场的形成.目前存在的问题是,临床促进护场形成用药良莠不齐,病种繁杂,缺乏统一疗效标准及评判指标,样本数不足,无法准确有效地支撑护场理论的客观性、科学性、有效性,在广度和深度上均需加强.今后
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