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[摘 要]目的：应用hplc法测定酒石酸美托洛尔片中的净含量。方法：选用标准色谱柱、醋酸盐缓冲液、三乙胺、磷酸、冰醋酸、乙腈等，在固定波长、流速、温度条件下进行检测，了解其线性关系以及回收率，通过多次实验进行比较，获取最佳结果。结果：参数条件上，取C18色谱柱220mm*4.6mm、5μm，醋酸盐缓冲液取3.9g并加水810ml稀释，三乙胺取2.0ml、磷酸取3.0ml、冰醋酸取10.0ml、乙腈824：146作为流动相，取固定波长275nm、流速条件1.0ml/min、柱温为30℃时，酒石酸美托洛尔在0.05—4mg·ml-1范围内的线性关系良好，反复实验获取r=0.99995，酒石酸美托洛尔回收率则达到99.4%的高水平。结论：应用hplc法测定酒石酸美托洛尔片中的净含量效果良好，在固定参数下了解了线性关系水平，且具有较高的回收率。
[关键词]hplc法；酒石酸美托洛尔；磷酸；三乙胺
中图分类号：S358 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2018）26-0193-01
前言：hplc法也即高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography），属于色谱法的分支之一，其特色是以液体作为流动相，通过高压输液系统将对象推入色谱柱中进行分析，在医学、化学甚至法检等领域得到广泛应用。酒石酸美托洛尔片一般用于治疗心肌梗死、高血压、心脏神经官能症等疾病，其核心成分为酒石酸美托洛尔，测定药品中酒石酸美托洛尔的含量对于推动医学研究和进步有一定的积极意义，我院针对相关内容进行了研究，所获结果如下：
1.仪器与试剂
1.1 仪器
本次试验主要应用高效液相色谱仪进行，色谱仪型号为Waters510，色谱工作站为N2000，波长检测器型号为Waters2487，可进行波长的高精度调整，分析天平选用赛多利斯BPZn—D，为保证试验精度，应用超声波清洗器辅助试验，型号为KQ—300VDE，光度计选用双光束紫外可见型，型号为TU—1901。色谱柱选用C18色谱柱220mm*4.6mm、5μm。经检测所用仪器符合试验要求。
1.2 试剂
选用酒石酸美托洛尔片作为药剂（生产厂家：阿斯利康制药有限公司，批准文号：国药准字H32025391），所用乙腈、甲醇等均为色谱纯，水为蒸馏处理后的纯净水，醋酸盐缓冲液、三乙胺、磷酸、冰醋酸等均为分析纯，经检测所用试剂符合试验要求。
2.测定过程
2.1 色谱条件选取
依据文献记载确定色谱条件包括流动相、波长和柱温。流动相为：醋酸盐缓冲液取3.9g并加水810ml稀释，三乙胺取2.0ml、磷酸取3.0ml、冰醋酸取10.0ml制成混合溶液后摇匀，再添加乙腈824：146。检测波长：此前的实验中，学者所取波长略有差别，本次研究确定检测波长为275nm。柱温：选取柱温为固定温度30℃，并利用设备保持温度稳定。此外，要求酒石酸美托洛尔峰计算应大于2000。
2.2 溶媒制备
应用纯净水、乙醇（浓度50%），以及此前制备的流动相进行溶媒制备，在超声条件下提取。超声振荡的时间分别为20min、30min、40min，对提取的溶媒进行分析，发现时间条件不会显著影响溶媒质量，因此该参数确定为20min，以提升实验的总体效率。
2.3 实验溶液制备
在无菌条件下进行实验溶液制备，应用天平精确称取各类试剂用量，放置于塞锥形瓶中，精确称取流动相10mL，进行超声冷却处理，使其与室温条件平衡，如果出现挥发损耗，则进行补充，使总量保持稳定，之后摇晃均匀、过滤，获取实验用滤液[1]。
2.4 精密度测定
完成实验溶液、溶媒的制备后，进行精密度测定。精确称取酒石酸美托洛尔3g，加入流动相制成混合溶液，浓度要求达到0.3mg·ml-1，作为标准观察溶液，选取固定色谱条件，精确称取10μL反复进行5次实验，对峰面积进行记录和计算，5次实验结果表明，RSD稳定在0.65%左右，这表明实验的精确度可以得到保证。
2.6 线性考察
精确称取酒石酸美托洛尔3g，加入流动相制成混合溶液，浓度分别要求达到0.3mg·ml-1、0.4mg·ml-1、0.5mg·ml-1、0.6mg·ml-1、0.7mg·ml-1，在固定参数条件下，分别称取10μL各进行5次实验，对峰面积进行记录和计算，根据固定条件获取峰面积计算方程式为16541.32x-8965.36（r=0.99995）。一固定方程为基础，反复计算后获取结果，表明酒石酸美托洛尔在0.05—4mg·ml-1范围内的线性关系良好。
2.7 回归率实验
在固定参数条件下。进一步进行会规律分析实验，选用酒石酸美托洛尔片15片作為药剂（生产厂家：阿斯利康制药有限公司，批准文号：国药准字H32025391），并对药剂进行加工处理，其中5片中酒石酸美托洛尔含量为70%、另外5片中酒石酸美托洛尔含量为90%、最后5片中酒石酸美托洛尔含量为110%，选取固定色谱条件进行试验，实验共进行15次，综合计算结果表明回收率可以达到99.4%，RSD稳定在0.65%左右。
3.讨论
对各类资料进行分析发现，此前研究人员进行酒石酸美托洛尔含量测定时，选取的检测波长一般在180-910nm之间，受限于当时的技术条件，色谱分析的误差明显，因此始终未能了解最佳检测波长[2]。本次实验中，技术条件较为理想，经过测定和文献分析，发现当检测波长处于275nm时，峰面积最大，能够为后续分析提供最佳参考，因此确定检测波长为275nm。参数条件的确定通过文献分析和实测获取，结合实验结果，酒石酸美托洛尔片中的净含量一般处于标示量95%-105%的水平。
综上所述，应用hplc法测定酒石酸美托洛尔片中的净含量效果良好，在固定参数下了解了线性关系水平，且具有较高的回收率。
参考文献
[1] 裴贵珍，漆新文，李文军.酒石酸美托洛尔片仿制药与原研药溶出曲线的相似性评价[J].中国药房，2017，28（09）：1262-1264.
[2] 蔡美明，李忠红，陈民辉.国产酒石酸美托洛尔片的溶出度质量评价[J].药学与临床研究，2015，23（06）：546-548.
作者简介
李铁胜（1981），男，黑龙江省大兴安岭地区加格达奇区人，民族：蒙古，职称：副主任药师，学历：大学本科。研究方向：药品检验。
[关键词]hplc法；酒石酸美托洛尔；磷酸；三乙胺
中图分类号：S358 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2018）26-0193-01
前言：hplc法也即高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography），属于色谱法的分支之一，其特色是以液体作为流动相，通过高压输液系统将对象推入色谱柱中进行分析，在医学、化学甚至法检等领域得到广泛应用。酒石酸美托洛尔片一般用于治疗心肌梗死、高血压、心脏神经官能症等疾病，其核心成分为酒石酸美托洛尔，测定药品中酒石酸美托洛尔的含量对于推动医学研究和进步有一定的积极意义，我院针对相关内容进行了研究，所获结果如下：
1.仪器与试剂
1.1 仪器
本次试验主要应用高效液相色谱仪进行，色谱仪型号为Waters510，色谱工作站为N2000，波长检测器型号为Waters2487，可进行波长的高精度调整，分析天平选用赛多利斯BPZn—D，为保证试验精度，应用超声波清洗器辅助试验，型号为KQ—300VDE，光度计选用双光束紫外可见型，型号为TU—1901。色谱柱选用C18色谱柱220mm*4.6mm、5μm。经检测所用仪器符合试验要求。
1.2 试剂
选用酒石酸美托洛尔片作为药剂（生产厂家：阿斯利康制药有限公司，批准文号：国药准字H32025391），所用乙腈、甲醇等均为色谱纯，水为蒸馏处理后的纯净水，醋酸盐缓冲液、三乙胺、磷酸、冰醋酸等均为分析纯，经检测所用试剂符合试验要求。
2.测定过程
2.1 色谱条件选取
依据文献记载确定色谱条件包括流动相、波长和柱温。流动相为：醋酸盐缓冲液取3.9g并加水810ml稀释，三乙胺取2.0ml、磷酸取3.0ml、冰醋酸取10.0ml制成混合溶液后摇匀，再添加乙腈824：146。检测波长：此前的实验中，学者所取波长略有差别，本次研究确定检测波长为275nm。柱温：选取柱温为固定温度30℃，并利用设备保持温度稳定。此外，要求酒石酸美托洛尔峰计算应大于2000。
2.2 溶媒制备
应用纯净水、乙醇（浓度50%），以及此前制备的流动相进行溶媒制备，在超声条件下提取。超声振荡的时间分别为20min、30min、40min，对提取的溶媒进行分析，发现时间条件不会显著影响溶媒质量，因此该参数确定为20min，以提升实验的总体效率。
2.3 实验溶液制备
在无菌条件下进行实验溶液制备，应用天平精确称取各类试剂用量，放置于塞锥形瓶中，精确称取流动相10mL，进行超声冷却处理，使其与室温条件平衡，如果出现挥发损耗，则进行补充，使总量保持稳定，之后摇晃均匀、过滤，获取实验用滤液[1]。
2.4 精密度测定
完成实验溶液、溶媒的制备后，进行精密度测定。精确称取酒石酸美托洛尔3g，加入流动相制成混合溶液，浓度要求达到0.3mg·ml-1，作为标准观察溶液，选取固定色谱条件，精确称取10μL反复进行5次实验，对峰面积进行记录和计算，5次实验结果表明，RSD稳定在0.65%左右，这表明实验的精确度可以得到保证。
2.6 线性考察
精确称取酒石酸美托洛尔3g，加入流动相制成混合溶液，浓度分别要求达到0.3mg·ml-1、0.4mg·ml-1、0.5mg·ml-1、0.6mg·ml-1、0.7mg·ml-1，在固定参数条件下，分别称取10μL各进行5次实验，对峰面积进行记录和计算，根据固定条件获取峰面积计算方程式为16541.32x-8965.36（r=0.99995）。一固定方程为基础，反复计算后获取结果，表明酒石酸美托洛尔在0.05—4mg·ml-1范围内的线性关系良好。
2.7 回归率实验
在固定参数条件下。进一步进行会规律分析实验，选用酒石酸美托洛尔片15片作為药剂（生产厂家：阿斯利康制药有限公司，批准文号：国药准字H32025391），并对药剂进行加工处理，其中5片中酒石酸美托洛尔含量为70%、另外5片中酒石酸美托洛尔含量为90%、最后5片中酒石酸美托洛尔含量为110%，选取固定色谱条件进行试验，实验共进行15次，综合计算结果表明回收率可以达到99.4%，RSD稳定在0.65%左右。
3.讨论
对各类资料进行分析发现，此前研究人员进行酒石酸美托洛尔含量测定时，选取的检测波长一般在180-910nm之间，受限于当时的技术条件，色谱分析的误差明显，因此始终未能了解最佳检测波长[2]。本次实验中，技术条件较为理想，经过测定和文献分析，发现当检测波长处于275nm时，峰面积最大，能够为后续分析提供最佳参考，因此确定检测波长为275nm。参数条件的确定通过文献分析和实测获取，结合实验结果，酒石酸美托洛尔片中的净含量一般处于标示量95%-105%的水平。
综上所述，应用hplc法测定酒石酸美托洛尔片中的净含量效果良好，在固定参数下了解了线性关系水平，且具有较高的回收率。
参考文献
[1] 裴贵珍，漆新文，李文军.酒石酸美托洛尔片仿制药与原研药溶出曲线的相似性评价[J].中国药房，2017，28（09）：1262-1264.
[2] 蔡美明，李忠红，陈民辉.国产酒石酸美托洛尔片的溶出度质量评价[J].药学与临床研究，2015，23（06）：546-548.
作者简介
李铁胜（1981），男，黑龙江省大兴安岭地区加格达奇区人，民族：蒙古，职称：副主任药师，学历：大学本科。研究方向：药品检验。