【摘 要】
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目的 探究土荆芥种子总黄酮提取物对肝癌细胞增殖的抑制作用及机制.方法 采用AO/EB染色法观察细胞的凋亡情况;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;电镜观察细胞的亚显微结构;
【机 构】
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四川师范大学生命科学学院,四川成都610101
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目的 探究土荆芥种子总黄酮提取物对肝癌细胞增殖的抑制作用及机制.方法 采用AO/EB染色法观察细胞的凋亡情况;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;电镜观察细胞的亚显微结构;利用高通量测序技术分析细胞转录组的变化,Western blotting检测自噬和凋亡相关蛋白;线粒体膜电位探针试剂盒检测线粒体膜电位的的变化;活性氧(ROS)测定试剂盒检测活性氧的水平.结果 土荆芥种子总黄酮提取物以剂量依赖性方式抑制SMCC-7721细胞的增殖(t=44.014,P<0.05),并使细胞周期停滞在G2期(t=77.071,P<0.01).电子显微镜观察到细胞核膜皱缩,出现核碎裂,核内染色质聚集,线粒体肿胀、嵴断裂,细胞内出现许多自噬体和自噬溶酶体.转录组测序后,进行DEG富集分析,显示细胞凋亡相关基因Caspases-3、Caspases-4表达水平上调,Caspases-9的表达水平下调,细胞周期蛋白P21、CDK、Cyclin明显上调(P<0.01);GO分析主要富集在自噬反应生物学过程;KEGG分析主要富集在自噬、凋亡、细胞衰老和铁死亡信号通路.Western blotting结果表明SMMC-7721细胞中随着土荆芥种子总黄酮浓度的上升凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9和Bad蛋白的表达均上调,Bcl-2蛋白表达下调均具有统计学差异(t=7.624,P<0.01;t=32.071,P<0.01;t=9.383,P<0.01;t=11.832,P<0.01);自噬相关蛋白AMPK、Beclin-1蛋白的表达上调,LC3-I向LC3-II的转化量也逐渐增加,而mTOR蛋白的表达下调(t=9.280,P<0.01;=4.577,P<0.05;t=17.007,P<0.01;t=7.96,P<0.01).细胞内线粒体膜电位降低(t=20.585,P<0.05).ROS含量上升(F=14.925,P<0.01).结论 土荆芥种子总黄酮提取物通过诱导细胞凋亡、自噬和周期阻滞抑制人肝癌SMCC-7721细胞增殖.
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