【摘 要】
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目的:探讨顺铂(CDDP)处理肺癌细胞后NSUN2 pre-mRNA的剪接变化.方法:在NSUN2基因的pre-mRNA有选择性剪接的外显子两侧的外显子上设计检测引物,选取16例非小细胞肺癌患者的肿
【机 构】
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昆明医科大学 中国医学科学院医学生物学研究所,云南 昆明 650000中国医学科学院 &北京协和医学院 医学生物学研究所,云南 昆明 650118;昆明医科大学 第二附属医院,云南 昆明 650000
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目的:探讨顺铂(CDDP)处理肺癌细胞后NSUN2 pre-mRNA的剪接变化.方法:在NSUN2基因的pre-mRNA有选择性剪接的外显子两侧的外显子上设计检测引物,选取16例非小细胞肺癌患者的肿瘤组织及其癌旁正常组织,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测组织NSUN2各mRNA剪接异构体的表达;取人肺癌细胞系A549细胞和H1299细胞分别用不同浓度CDDP处理,A549细胞分为0、8、16、24、32、40、48及56μmol/L组,H1299细胞分为0、12、24、36、48、60、72及84μmol/L组,采用RT-PCR检测各组细胞NSUN2各mRNA剪接异构体的表达;RT-PCR产物胶回收后进行TA克隆测序并与NCBI网站数据库中NSUN2的序列进行比对分析.结果:人肺癌细胞系A549细胞和H1299细胞及肺癌临床样本中NSUN2基因可编码蛋白的mRNA剪接异构体表达量最高,占主导地位;随着CDDP浓度增加,NSUN2可编码蛋白的异构体在H1299细胞的高浓度组中的表达下降(P<0.01),非编码蛋白的异构体在A549细胞和H1299细胞的高浓度组中表达均上升(P<0.05);检测到2种未见报道的mRNA剪接异构体.结论:CDDP处理后肺癌细胞中NSUN2 pre-mRNA剪接会发生变化,NSUN2基因的表达存在pre-mRNA选择性剪接调控.
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