【摘 要】
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为深入研究甘蓝S位点受体激酶(SRK)和S位点富含半胱氨酸蛋白(SCR)间相互识别的分子机理,以具有典型自交不亲和性的甘蓝D3为材料,利用巢式PCR分别扩增SRK胞外域(eSRK)和SCR,通
【机 构】
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西南大学植物生理生物化学实验室,常熟理工学院生物与食品工程学院,西南大学重庆市蔬菜学重点实验室
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为深入研究甘蓝S位点受体激酶(SRK)和S位点富含半胱氨酸蛋白(SCR)间相互识别的分子机理,以具有典型自交不亲和性的甘蓝D3为材料,利用巢式PCR分别扩增SRK胞外域(eSRK)和SCR,通过酵母双杂交检测二者之间的相互作用,并利用同源重组技术将eSRK与GAL4报告基因DNA活化域融合(pGADT7eSRK)以及SCR与GAL4报告基因DNA结合域融合(pGBKT7SCR).两种重组质粒分别转化酵母Y187和Y2HGold后未出现自激活现象.融合的二倍体酵母(pGADT7eSRK×pGBKT7SCR)能在选择性固体培养基(SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-a-Gal/AbA)上生长,并且菌落呈蓝色.结果表明,eSRK与SCR蛋门能够相互结合,为深入研究二者作用位点成功建立了一个技术平台.
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