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【摘要】 目的：观察磷酸化表皮生长因子受体与鼻咽癌患者预后的关系。方法：选择2012年1月-2013年6月在本院治疗的107例鼻咽癌患者的病理标本行磷酸化表皮生长因子受体检测，根据结果分成阳性和阴性两组，阴性组47例，阳性组60例，两组患者均行同步放化疗，治疗后定期随访，分析比较两组的总生存率、无进展生存率和无局部区域复发生存率。结果：两组3年总生存率及3年无进展生存率比较差异无统计学意义（P>0.05）。阴性组3年无局部区域复发生存率高于阳性组，比较差异有统计学意义（P=0.038）。结论：磷酸化表皮生长因子受体与鼻咽癌的总生存及无进展生存无相关性，与鼻咽癌的局部控制生存有相关性。
【关键词】 鼻咽肿瘤； 磷酸化表皮生长因子受体； 预后
Study on the Relationship between the Phosphorylated Epidermal Growth Factor Receptor and the Prognosis of Patients with Nasopharyngeal Carcinoma/WU Wei.//Medical Innovation of China，2015，12（30）：050-053
【Abstract】 Objective：To observe the relationship between the phosphorylated epidermal growth factor receptor and the prognosis of patients with nasopharyngeal carcinoma.Method：The phosphorylated epidermal growth factor receptor in pathological specimens of patients who were treated in our hospital from January 2012 to June 2013 for nasopharyngeal carcinoma was detected.These patients were divided into two groups according to the detection result，with 47 patients in the negative group and 60 patients in the positive group.Patients in the two groups were treated with concurrent chemoradiotherapy and were given routine follow-up after the treatment.The overall survival rate，progression free survival rate and locoregional failure-free survival rate were analyzed and compared.Result：The differences in overall survival rates in three years and progression free survival rates in three years in the two groups were not statistically significant（P>0.05）.The locoregional failure-free survival rate of the negative group was higher than that of the positive group，the difference was statistically significant（P=0.038）.Conclusion：There is no correlation between phosphorylated epidermal growth factor receptor and the overall survival and progression free survival，but it is correlated with the locoregional control of nasopharyngeal carcinoma.
【Key words】 Nasopharyngeal neoplasm； Phosphorylated epidermal growth factor receptor； Prognosis
First-author’s address：The Cancer Hospital of Ganzhou City，Ganzhou 341000，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.30.017
鼻咽癌是我国南方常见的恶性肿瘤，放化疗是其最主要治疗方法，近年来，随着肿瘤基础研究的不断深入，分子靶向治疗越来越广泛地应用于鼻咽癌的个体化治疗体系当中。头颈部恶性肿瘤存在表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）超表达现象，鼻咽癌也不例外，很多研究表明，表皮生长因子高表达与鼻咽癌预后有关，磷酸化EGFR（phosphorylated EGFR，pEGFR）是EGFR的活性形式，有学者认为，EGFR在鼻咽癌的发生发展中的作用并非受体高表达，而活性受体才是癌细胞增殖的关键因素。本研究对2012年1月-2013年6月在本院治疗的107例鼻咽癌患者的病理标本行pEGFR检测，观察pEGFR不同表达患者的生存情况是否有差异，现具体报道如下。 1 资料与方法
1.1 一般资料 选择2012年1月-2013年6月在本院经病理和影像学资料证实为鼻咽癌，病理类型为鼻咽未分化型非角性癌患者107例作为研究对象，其中男77例，女30例，年龄18～77岁，中位年龄50岁。根据pEGFR检测结果分为两组，阴性组47例，阳性组60例。两组一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性，见表1。
1.2. 方法
1.2.1 放化疗 阴性组有41例患者行诱导化疗，阳性组有50例患者行诱导化疗，诱导化疗采用“顺铂+5-氟尿嘧啶”或“多西他赛+顺铂+5-氟尿嘧啶”方案，其中多西他赛60 mg/m2 d1；顺铂30 mg/m2 d1～5；5-氟尿嘧啶500 mg/m2 d1～5。所有患者均接受根治性三维适形放射治疗，采用直线加速器面颈联合野照射，50 GY以后采用面颈分野放射，放疗总剂量：鼻咽68～74 GY/34～37次，颈部（N1～3）66～70 GY/33～35次，颈部（N0）50～54 GY/25～27次，放疗期间均配合化疗药物增敏，化疗药物采用单药“DDP”方案，1次/周，30 mg/（m2·次）。
1.2.2 pEGFR检测
1.2.2.1 试剂 鼠抗人pEGFR单克隆抗体购买自美国Abcam公司，二抗及DAB显色液来自购买自福州迈新公司的Elivision Super DAB检测试剂盒。
1.2.2.2 免疫组化检测方法 免疫组织化学染色采用SP二步法。所有标本组织均采用4%中性甲醛液固定，常规包埋、4 μm切片、脱蜡水化，进行高温高压抗原修复，加3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶，依次滴加一抗、二抗，DAB显色、苏木素复染。操作步骤严格按照说明书进行，用乳腺癌标本作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。
1.2.2.3 结果判断 由两位高年资病理医生独立阅片。pEGFR染色主要定位于细胞浆，染色强度计分：0分（无染色）、1分（淡黄色），2分（棕黄色）、3分（棕褐色）；染色范围计分：0分（无阳性细胞）、1分（阳性细胞1%～25%），2分（阳性细胞26%～50%）、3分（阳性细胞51%～75%）、4分（阳性细胞76%～100%）。两者相加得分0～7分，以大于等于3分为阳性，3分以下为阴性。
1.3 观察指标 所有患者均进行随访，观察两组患者的总生存率、无进展生存率和无局部区域复发生存率。
1.4 统计学处理 应用SPSS 18.0软件包对所得数据进行统计学处理，计数资料比较采用 字2检验，用Kaplan-Meier法计算生存率及比较生存情况，进行Log-rank检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组总生存率比较 随访截止时间2015年5月，随访率96.3%，中位随访时间31个月（23～40个月）。阴性组3年总生存率为77.6%，阳性组3年总生存率为69.4%，两组3年总生存率比较，差异无统计学意义（ 字2=2.431，P=0.119），见图1。
2.2 两组无进展生存率比较 阴性组3年无进展生存率为70.5%，阳性组3年无进展生存率为62.9%，两组3年无进展生存率比较，差异无统计学意义（ 字2=2.065，P=0.151），见图2。
2.3 两组无局部区域复发生存率比较 阴性组3年无局部区域复发生存率为86.0%，阳性组3年无局部区域复发生存率为65.7%，阴性组3年无局部区域复发生存率高于阳性组，比较差异有统计学意义（ 字2=4.303，P=0.038），见图3。
图1 两组总生存率比较
图2 两组无进展生存率比较
图3 两组无局部区域复发生存率比较
3 讨论
鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是发生在鼻咽部的一种恶性肿瘤，是我国最常见的恶性肿瘤之一，恶性程度较高，其发病机制尚未完全明确[1-2]。近年来对于影响研究鼻咽癌的预后因素的研究越来越多。其中，pEGFR的研究更为研究者所关注。
EGFR为酪氨酸激酶受体，属于Ⅰ型受体酪氨酸激酶超家族，在体内通过多种信号途径在肿瘤的发生发展中发挥重要作用[3]。EGFR在哺乳动物组织中，尤其是在其上皮、间质、神经源性器官中广泛表达，在头颈肿瘤中表达较为常见，87.5%（35/40）的口腔鳞癌，89%（48/54）的鼻咽癌，93.3%（42/45）的喉癌组织均有EGFR 的过表达[4-6]。EGFR是涉及细胞增殖和肿瘤发生、发展中的极为重要的受体信号系统，和肿瘤的侵袭、转移、恶性程度及预后密切相关。有成熟的研究也显示了EGFR控制了癌症的表型，有促进肿瘤细胞增殖以及转移的作用，同时可以促进血管的生成和抑制肿瘤细胞的凋亡等作用。自身磷酸化是EGFR的活性主要调节方式，EGFR通过磷酸化的酪氨酸残基与下游底物酶反应而传递信号。其下游主要的信号通路包括Ras-Raf-MEK-erk/MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路和JAK/STAT信号通路等。
张小鹏等[7]的研究认为COX-2和EGFR在鼻咽癌患者的组织和血清中都有较高的浓度，同时其浓度的高低和鼻咽癌患者的分期有相关性，故可以成为鼻咽癌患者的诊断和预后的参考指标。EGFR过表达与鼻咽癌进程、放疗抗拒性和预后差有关[8-11]。pEGFR是EGFR的活性形式。EGFR与细胞内其他的细胞因子，例如EGF、TGF-α相结合以后，使EGFR本身磷酸化而使其活化，进一步开启了MAPK通路，MAPK通路的作用可以使细胞外的信号调节激酶发生了核转位进而活化，最后促使靶基因进行转录。并且，在临床上的相关实验也证明了干扰EGFR进行磷酸化可以抑制其下游通路的发生，进而使细胞周期发生阻滞和延迟肿瘤的生长速度。有研究已经证实了在非小细胞肺癌患者中，pEGFR的高表达和临床预后差有明显的关系[12]。也有研究表明pEGFR低表达鼻咽癌患者无转移生存明显优于高表达患者，故pEGFR可能在鼻咽癌的转移中起着重要作用[13]。袁太泽等[14]的研究显示pEGFR高表达患者5年无转移生存率显著低于pEGFR低表达者（P=0.012）。也有学者认为EGFR表达与患者生存无关[15]。 本研究的结果显示，两组3年总生存率与无进展生存率比较，差异均无统计学意义（P>0.05），阴性组3年无局部复发生存率高于阳性组，比较差异有统计学意义（P=0.038）。pEGFR与患者的预后差相关联，本验的研究结果在临床方面进一步证实了pEGFR的过表达与鼻咽癌患者的局部控制差相关。这一研究结论在临床有一定的实际应用价值，可作为鼻咽癌患者预后的一个推测指标。但有关pEGFR导致鼻咽癌患者预后差的分子机制，本试验未做相关研究，可在以后的研究中进一步探索。
参考文献
[1] Lu J J，Cooper J S，Lee A W M.Nasopharyngeal cancer：multidisciplinary management[M].Germany：Springer Verlag，Heidelberg，2010：1-7.
[2]赵平.中国肿瘤临床年鉴[M].北京：中国协和医科大学出版社，2010：2.
[3] Heuckmann J M，Rauh D，Thomas R K.Epidermal growth factor receptor（EGFR） signaling and covalent EGFR inhibition in lung cancer[J].Clin Oncol，2012，30（27）∶3417-3420.
[4] Sarkis S A，Abdullah B H，Majeed B A，et al.Immunohistochemical expression of epidermal growth factor receptor （EGFR） in oral squamous cell carcinoma in relation to proliferation，apoptosis，angiogenesis and lymphangiogenesis[J].Head Neck Oncol，2010，2（13）：1-8.
[5] Chua D T，Nicholls J M，Sham J S，et al.Prognostic value of epidermal growth factor receptor expression in patients with advanced stage nasopharyngeal carcinoma treated with induction chemotherapy and radiotherapy[J].Int J Radiation Oncology Biol Phys，2004，59（1）：11-20.
[6] Starska K，Glowacka E，Lewy-Trenda I，et al.EGFR immunoexpression and peripheral blood cytokine secretion as potential biomarkers of tumor behavior in laryngeal squamous cell carcinoma[J].Med Sci Monit，2009，15（10）：518-527.
[7]张小鹏，边枫，王丽新.环氧合酶-2及表皮生长因子受体在鼻咽癌中的表达及相关性[J].山东大学耳鼻喉眼学报，2014，28（3）：23-27.
[8] Wissing J，Jansch L，Nimtz M，et al.Proteomics analysis of protein kinases by target class-selective prefractionation and tandem mass spectrometry[J].Mol Cell Proteomics，2007，6（3）：537-547.
[9] Knight Z A，Schilling B，Row R H，et al.Phosphospecific proteolysis for mapping sites of protein phosphorylation[J].Nat Biotechnol，2003，21（9）：1047-1054.
[10] McLachlin D T，Chait B T.Improved beta-elimination-based affinity purification strategy for enrichment of phosphopeptides[J].Anal Chem，2003，75（24）：6826-6836.
[11] Tseng H C，Ovaa H，Wei N J，et al.Phosphoproteornic analysis with a solid-phase capture-release-tag approach[J].Chem Biol，2005，12（7）：769-777.
[12] Sonnweber B，Dlaska M，Skvortsov S，et al.Highpredictive value of epidermal growth factor receptor phosphorylation but not of EGFR vmutationin resected stage non-smallcell lung cancer（NSCLC）[J].J Clin Pathol，2006，59（3）：255-259.
[13] Ma B B，Poon T C，To K F，et al.Prognostic significance of tumor angiogenesis，Ki67，p53 oncoprotein，epidermal growth factor receptor and HER2 receptor protein expression in undifferentiated nasopharyngeal lcarcinoma-a prospective study[J].Head Neck，2003，25（10）：864-872.
[14]袁太泽，李晓霞，曹云.表皮生长因子受体活化与鼻咽癌患者无转移生存的关系[J].癌症，2008，27（5）：449-454.
[15] Leong J L，Loh K S，Putti T C，et al.Epidermal growth factor receptor in undifferentiated carcinoma of the nasopharynx[J].Laryngoscope，2004，114（1）：153-157.
（收稿日期：2015-08-04） （本文编辑：王利）
【关键词】 鼻咽肿瘤； 磷酸化表皮生长因子受体； 预后
Study on the Relationship between the Phosphorylated Epidermal Growth Factor Receptor and the Prognosis of Patients with Nasopharyngeal Carcinoma/WU Wei.//Medical Innovation of China，2015，12（30）：050-053
【Abstract】 Objective：To observe the relationship between the phosphorylated epidermal growth factor receptor and the prognosis of patients with nasopharyngeal carcinoma.Method：The phosphorylated epidermal growth factor receptor in pathological specimens of patients who were treated in our hospital from January 2012 to June 2013 for nasopharyngeal carcinoma was detected.These patients were divided into two groups according to the detection result，with 47 patients in the negative group and 60 patients in the positive group.Patients in the two groups were treated with concurrent chemoradiotherapy and were given routine follow-up after the treatment.The overall survival rate，progression free survival rate and locoregional failure-free survival rate were analyzed and compared.Result：The differences in overall survival rates in three years and progression free survival rates in three years in the two groups were not statistically significant（P>0.05）.The locoregional failure-free survival rate of the negative group was higher than that of the positive group，the difference was statistically significant（P=0.038）.Conclusion：There is no correlation between phosphorylated epidermal growth factor receptor and the overall survival and progression free survival，but it is correlated with the locoregional control of nasopharyngeal carcinoma.
【Key words】 Nasopharyngeal neoplasm； Phosphorylated epidermal growth factor receptor； Prognosis
First-author’s address：The Cancer Hospital of Ganzhou City，Ganzhou 341000，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.30.017
鼻咽癌是我国南方常见的恶性肿瘤，放化疗是其最主要治疗方法，近年来，随着肿瘤基础研究的不断深入，分子靶向治疗越来越广泛地应用于鼻咽癌的个体化治疗体系当中。头颈部恶性肿瘤存在表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）超表达现象，鼻咽癌也不例外，很多研究表明，表皮生长因子高表达与鼻咽癌预后有关，磷酸化EGFR（phosphorylated EGFR，pEGFR）是EGFR的活性形式，有学者认为，EGFR在鼻咽癌的发生发展中的作用并非受体高表达，而活性受体才是癌细胞增殖的关键因素。本研究对2012年1月-2013年6月在本院治疗的107例鼻咽癌患者的病理标本行pEGFR检测，观察pEGFR不同表达患者的生存情况是否有差异，现具体报道如下。 1 资料与方法
1.1 一般资料 选择2012年1月-2013年6月在本院经病理和影像学资料证实为鼻咽癌，病理类型为鼻咽未分化型非角性癌患者107例作为研究对象，其中男77例，女30例，年龄18～77岁，中位年龄50岁。根据pEGFR检测结果分为两组，阴性组47例，阳性组60例。两组一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性，见表1。
1.2. 方法
1.2.1 放化疗 阴性组有41例患者行诱导化疗，阳性组有50例患者行诱导化疗，诱导化疗采用“顺铂+5-氟尿嘧啶”或“多西他赛+顺铂+5-氟尿嘧啶”方案，其中多西他赛60 mg/m2 d1；顺铂30 mg/m2 d1～5；5-氟尿嘧啶500 mg/m2 d1～5。所有患者均接受根治性三维适形放射治疗，采用直线加速器面颈联合野照射，50 GY以后采用面颈分野放射，放疗总剂量：鼻咽68～74 GY/34～37次，颈部（N1～3）66～70 GY/33～35次，颈部（N0）50～54 GY/25～27次，放疗期间均配合化疗药物增敏，化疗药物采用单药“DDP”方案，1次/周，30 mg/（m2·次）。
1.2.2 pEGFR检测
1.2.2.1 试剂 鼠抗人pEGFR单克隆抗体购买自美国Abcam公司，二抗及DAB显色液来自购买自福州迈新公司的Elivision Super DAB检测试剂盒。
1.2.2.2 免疫组化检测方法 免疫组织化学染色采用SP二步法。所有标本组织均采用4%中性甲醛液固定，常规包埋、4 μm切片、脱蜡水化，进行高温高压抗原修复，加3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶，依次滴加一抗、二抗，DAB显色、苏木素复染。操作步骤严格按照说明书进行，用乳腺癌标本作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。
1.2.2.3 结果判断 由两位高年资病理医生独立阅片。pEGFR染色主要定位于细胞浆，染色强度计分：0分（无染色）、1分（淡黄色），2分（棕黄色）、3分（棕褐色）；染色范围计分：0分（无阳性细胞）、1分（阳性细胞1%～25%），2分（阳性细胞26%～50%）、3分（阳性细胞51%～75%）、4分（阳性细胞76%～100%）。两者相加得分0～7分，以大于等于3分为阳性，3分以下为阴性。
1.3 观察指标 所有患者均进行随访，观察两组患者的总生存率、无进展生存率和无局部区域复发生存率。
1.4 统计学处理 应用SPSS 18.0软件包对所得数据进行统计学处理，计数资料比较采用 字2检验，用Kaplan-Meier法计算生存率及比较生存情况，进行Log-rank检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组总生存率比较 随访截止时间2015年5月，随访率96.3%，中位随访时间31个月（23～40个月）。阴性组3年总生存率为77.6%，阳性组3年总生存率为69.4%，两组3年总生存率比较，差异无统计学意义（ 字2=2.431，P=0.119），见图1。
2.2 两组无进展生存率比较 阴性组3年无进展生存率为70.5%，阳性组3年无进展生存率为62.9%，两组3年无进展生存率比较，差异无统计学意义（ 字2=2.065，P=0.151），见图2。
2.3 两组无局部区域复发生存率比较 阴性组3年无局部区域复发生存率为86.0%，阳性组3年无局部区域复发生存率为65.7%，阴性组3年无局部区域复发生存率高于阳性组，比较差异有统计学意义（ 字2=4.303，P=0.038），见图3。
图1 两组总生存率比较
图2 两组无进展生存率比较
图3 两组无局部区域复发生存率比较
3 讨论
鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是发生在鼻咽部的一种恶性肿瘤，是我国最常见的恶性肿瘤之一，恶性程度较高，其发病机制尚未完全明确[1-2]。近年来对于影响研究鼻咽癌的预后因素的研究越来越多。其中，pEGFR的研究更为研究者所关注。
EGFR为酪氨酸激酶受体，属于Ⅰ型受体酪氨酸激酶超家族，在体内通过多种信号途径在肿瘤的发生发展中发挥重要作用[3]。EGFR在哺乳动物组织中，尤其是在其上皮、间质、神经源性器官中广泛表达，在头颈肿瘤中表达较为常见，87.5%（35/40）的口腔鳞癌，89%（48/54）的鼻咽癌，93.3%（42/45）的喉癌组织均有EGFR 的过表达[4-6]。EGFR是涉及细胞增殖和肿瘤发生、发展中的极为重要的受体信号系统，和肿瘤的侵袭、转移、恶性程度及预后密切相关。有成熟的研究也显示了EGFR控制了癌症的表型，有促进肿瘤细胞增殖以及转移的作用，同时可以促进血管的生成和抑制肿瘤细胞的凋亡等作用。自身磷酸化是EGFR的活性主要调节方式，EGFR通过磷酸化的酪氨酸残基与下游底物酶反应而传递信号。其下游主要的信号通路包括Ras-Raf-MEK-erk/MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路和JAK/STAT信号通路等。
张小鹏等[7]的研究认为COX-2和EGFR在鼻咽癌患者的组织和血清中都有较高的浓度，同时其浓度的高低和鼻咽癌患者的分期有相关性，故可以成为鼻咽癌患者的诊断和预后的参考指标。EGFR过表达与鼻咽癌进程、放疗抗拒性和预后差有关[8-11]。pEGFR是EGFR的活性形式。EGFR与细胞内其他的细胞因子，例如EGF、TGF-α相结合以后，使EGFR本身磷酸化而使其活化，进一步开启了MAPK通路，MAPK通路的作用可以使细胞外的信号调节激酶发生了核转位进而活化，最后促使靶基因进行转录。并且，在临床上的相关实验也证明了干扰EGFR进行磷酸化可以抑制其下游通路的发生，进而使细胞周期发生阻滞和延迟肿瘤的生长速度。有研究已经证实了在非小细胞肺癌患者中，pEGFR的高表达和临床预后差有明显的关系[12]。也有研究表明pEGFR低表达鼻咽癌患者无转移生存明显优于高表达患者，故pEGFR可能在鼻咽癌的转移中起着重要作用[13]。袁太泽等[14]的研究显示pEGFR高表达患者5年无转移生存率显著低于pEGFR低表达者（P=0.012）。也有学者认为EGFR表达与患者生存无关[15]。 本研究的结果显示，两组3年总生存率与无进展生存率比较，差异均无统计学意义（P>0.05），阴性组3年无局部复发生存率高于阳性组，比较差异有统计学意义（P=0.038）。pEGFR与患者的预后差相关联，本验的研究结果在临床方面进一步证实了pEGFR的过表达与鼻咽癌患者的局部控制差相关。这一研究结论在临床有一定的实际应用价值，可作为鼻咽癌患者预后的一个推测指标。但有关pEGFR导致鼻咽癌患者预后差的分子机制，本试验未做相关研究，可在以后的研究中进一步探索。
参考文献
[1] Lu J J，Cooper J S，Lee A W M.Nasopharyngeal cancer：multidisciplinary management[M].Germany：Springer Verlag，Heidelberg，2010：1-7.
[2]赵平.中国肿瘤临床年鉴[M].北京：中国协和医科大学出版社，2010：2.
[3] Heuckmann J M，Rauh D，Thomas R K.Epidermal growth factor receptor（EGFR） signaling and covalent EGFR inhibition in lung cancer[J].Clin Oncol，2012，30（27）∶3417-3420.
[4] Sarkis S A，Abdullah B H，Majeed B A，et al.Immunohistochemical expression of epidermal growth factor receptor （EGFR） in oral squamous cell carcinoma in relation to proliferation，apoptosis，angiogenesis and lymphangiogenesis[J].Head Neck Oncol，2010，2（13）：1-8.
[5] Chua D T，Nicholls J M，Sham J S，et al.Prognostic value of epidermal growth factor receptor expression in patients with advanced stage nasopharyngeal carcinoma treated with induction chemotherapy and radiotherapy[J].Int J Radiation Oncology Biol Phys，2004，59（1）：11-20.
[6] Starska K，Glowacka E，Lewy-Trenda I，et al.EGFR immunoexpression and peripheral blood cytokine secretion as potential biomarkers of tumor behavior in laryngeal squamous cell carcinoma[J].Med Sci Monit，2009，15（10）：518-527.
[7]张小鹏，边枫，王丽新.环氧合酶-2及表皮生长因子受体在鼻咽癌中的表达及相关性[J].山东大学耳鼻喉眼学报，2014，28（3）：23-27.
[8] Wissing J，Jansch L，Nimtz M，et al.Proteomics analysis of protein kinases by target class-selective prefractionation and tandem mass spectrometry[J].Mol Cell Proteomics，2007，6（3）：537-547.
[9] Knight Z A，Schilling B，Row R H，et al.Phosphospecific proteolysis for mapping sites of protein phosphorylation[J].Nat Biotechnol，2003，21（9）：1047-1054.
[10] McLachlin D T，Chait B T.Improved beta-elimination-based affinity purification strategy for enrichment of phosphopeptides[J].Anal Chem，2003，75（24）：6826-6836.
[11] Tseng H C，Ovaa H，Wei N J，et al.Phosphoproteornic analysis with a solid-phase capture-release-tag approach[J].Chem Biol，2005，12（7）：769-777.
[12] Sonnweber B，Dlaska M，Skvortsov S，et al.Highpredictive value of epidermal growth factor receptor phosphorylation but not of EGFR vmutationin resected stage non-smallcell lung cancer（NSCLC）[J].J Clin Pathol，2006，59（3）：255-259.
[13] Ma B B，Poon T C，To K F，et al.Prognostic significance of tumor angiogenesis，Ki67，p53 oncoprotein，epidermal growth factor receptor and HER2 receptor protein expression in undifferentiated nasopharyngeal lcarcinoma-a prospective study[J].Head Neck，2003，25（10）：864-872.
[14]袁太泽，李晓霞，曹云.表皮生长因子受体活化与鼻咽癌患者无转移生存的关系[J].癌症，2008，27（5）：449-454.
[15] Leong J L，Loh K S，Putti T C，et al.Epidermal growth factor receptor in undifferentiated carcinoma of the nasopharynx[J].Laryngoscope，2004，114（1）：153-157.
（收稿日期：2015-08-04） （本文编辑：王利）