【摘 要】
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为了得到ｔＰＡ组合突变体ＦｒＧＧＩ在ＣＨＯ细胞中的高效表达，将表达质粒筛选基因启动子上游的增强子（ｅｎｈａｎｃｅｒ）去除，构建了ＦｒＧＧＩ真核表达质粒ｐＺＬＦｒＧＧＩ。酶切线性化后，采用大剂量ＤＮＡ电击介导法，转染ｄｈｆｒ基因缺陷型中国仓鼠卵巢细胞
【机 构】
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军事医学科学院生物工程研究所,解放军白求恩国际和平医院
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为了得到ｔＰＡ组合突变体ＦｒＧＧＩ在ＣＨＯ细胞中的高效表达，将表达质粒筛选基因启动子上游的增强子（ｅｎｈａｎｃｅｒ）去除，构建了ＦｒＧＧＩ真核表达质粒ｐＺＬＦｒＧＧＩ。酶切线性化后，采用大剂量ＤＮＡ电击介导法，转染ｄｈｆｒ基因缺陷型中国仓鼠卵巢细胞系（ＣＨＯｄｈｆｒ－）。氨甲喋呤（ＭＴＸ）筛选转染细胞，混合加压，挑选克隆，在１×１０－７ｍｏｌ／ＬＭＴＸ压力下，获得表达水平达１５００～２５００ＩＵ／１０６细胞·２４ｈ的细胞株。此细胞株表达水平稳定，形态良好，倍增时间约为３６ｈ，且有进一步提高表达水平的潜能，有望发展为工程细胞株
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