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摘 要：本实验研究制霉素搽剂质量控制与稳定性。方法：采用安捷伦十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（218mm×4.6mm，5μm），醋酸钠缓冲液（PH4.4）-乙腈（40∶60），检测波长为306nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。制霉素在50～250μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。制霉素平均回收率为99.3%。结论：本测定方法简便、准确。30℃的恒温箱内制霉素搽剂在第二个月就开始分解。冷处保存放置3个月后，制霉素搽剂未发生明显变化，表明制霉素搽剂可以冷处保存3个月。
关键词：制霉素；质量；稳定性
制霉素为黄色或棕黄色粉末；有类似谷物气味，有引湿性，对光，空气，酸和碱均不稳定。制霉素主要用于内服治疗消化道真菌感染或外用于表面皮肤真菌感染，如新型隐球菌、曲菌、毛霉菌、小孢子菌、荚膜组织浆胞菌、皮炎芽生菌及皮肤癣菌等[1-5]。搽剂最早出现于我国现存最早的出土于马王堆汉墓的古医方《五十二病方》，在我国有着悠久的历史。本实验研究制霉素搽剂质量控制与稳定性。
1 仪器与试药
1.1 仪器：长城狮鼎SHB-III型台式循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；XH-2008DE智能温控双频超声波萃取仪（北京祥鹄科技发展有限公司）；600220液相保护柱（天津琛航科苑科技发展有限公司）；GX-2050高温循环器（上海市百典仪器厂）；JY-M-800S恒温恒湿试验箱价格（上海巨怡环境试验设备有限公司）；电子分析天平（上海魅宇仪器设备有限公司）；GI-3000-12二元高压梯度液相色谱仪（通用（深圳）仪器有限公司）；GENESYS180紫外可见分光光度计（上海力晶科学仪器有限公司）；兰博OV3000大容量柱温箱（天津市兰博实验仪器设备有限公司）。
1.2 色谱柱：安捷伦十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（218mm×4.6mm，5μm）。
1.3 对照品：制霉素 购自中国药品生物制品检定所。
1.4 试剂：甲醇（北京天安联合科技有限公司）、冰醋酸（上海玻尔化学试剂有限公司）磷酸氢二钠（北京天安联合科技有限公司）、磷酸（北京天安联合科技有限公司）、醋酸钠（北京天安联合科技有限公司）、乙腈（北京天安联合科技有限公司）。
2 稳定性考察方法
将本品置于30℃的恒温箱内，分别于第1、2、3、4、5、6个月末取样并测定，考察外观、生物限度、含量的测定结果做比较。另取样品在冷处保存，分别于第1、2、3、4、5、6个月末取样并测定，考察外观、生物限度、含量的测定结果做比较。
3 质量控制
3.1 性状
本品为黄色或淡棕色黏稠性混悬液。符合《中国药典》2015年版对搽剂的要求。
3.2 含量测定
3.2.1 流动相的选择。分别考察0.01mol/L磷酸氢二钠-磷酸缓冲液（p H=2.2）-水（80：20）；醋酸钠缓冲液（PH4.4）-甲醇（40∶60）；醋酸钠缓冲液（PH4.4）-乙腈（40∶60）；醋酸钠缓冲液（PH4.4）-乙腈（50∶50）；乙腈-0.2%（质量分数）磷酸（体积比25：75）；醋酸钠缓冲液（PH4.4）-乙腈（40∶60）不同比例的流动相，结果以醋酸钠缓冲液（PH4.4）-乙腈（40∶60）；为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用醋酸钠缓冲液（PH4.4）-乙腈（40∶60）为流动相。依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[6]。流动相：醋酸钠缓冲液（PH4.4）-乙腈（40∶60），检测波长：306nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。理论板数按制霉素峰计算应不得低于2000。
3.2.2 对照品溶液的制备
精密称取制霉素对照品适量，置容量瓶中，加甲醇制成每1mL含100μg的溶液，即得。
3.2.3 供試品溶液的制备
取适量供试品精密称定，置具小烧杯中，精密加入甲醇10mL，用甲醇转移至50ml容量瓶中并稀释定容，超声处理5分钟，放冷，滤过。取续滤液，即得。
3.2.4 专属性试验
依照处方取除制霉素，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照3.2.4项下供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在制霉素出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
3.2.5 精密度试验
精密称取制霉素对照品适量，加甲醇使溶解，制成浓度为100μg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.73%，表明本方法精密度良好。
3.2.6 对照品的线性考察
精密称取制霉素对照品50mg，置100ml容量瓶中，加入甲醇溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取1、2、3、4、5mL，置于10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照3.2.2项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果表明，制霉素在50～250μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
3.2.7 重现性试验
称取同一批的制霉素搽剂样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.81%，结果表明此方法的重现性良好。
3.2.8 准确度试验
精密称取已知含量的样品6份，分别加入一定量的制霉素对照品，上述方法进行测定，计算回收率，平均回收率为99.5%，RSD=0.76%，结果表明样品加样回收率良好。
3.3 微生物限度检查
按照《中国药典》2015年版附录所载方法测定，结果符合规定。
4 讨论
此测定方法可用于制霉素搽剂中制霉素的含量测定。制霉素有引湿性，对光，空气，酸和碱均不稳定。所以本实验对制霉素搽剂质量控制与稳定性进行考察。30℃的恒温箱内制霉素搽剂在第二个月就开始分解。冷处保存放置3个月后，制霉素搽剂未发生明显变化。经测定发现，外观、微生物限度、含量均稳定，表明制霉素搽剂可以冷处保存3个月。
参考文献
[1]项薇薇，马小彬，刘彩双.行为干预、乳酸杆菌结合硝呋太尔制霉素治疗外阴阴道假丝酵母菌病的效果研究[J].中国美容医学，2012（18）.
[2]吴熊军.克霉唑与制霉菌素栓治疗妊娠期外阴阴道假丝酵母菌病疗效及安全性比较[J].中华医院感染学杂志，2013（06）.
[3]董雪翠，张淑玲，刘慧敏.黄苦洗液结合三维制霉素栓治疗霉菌性阴道炎疗效的临床观察[J].中国医药指南，2010（32）.
[4]张丽华.硝呋太尔制霉素阴道软胶囊治疗复发性念珠菌性外阴阴道病的疗效观察[J].海峡药学，2017（02）.
[5]谢冬艳.硝呋太尔制霉素阴道软胶囊治疗妊娠期细菌性阴道病的疗效观察[J].中国卫生标准管理，2017（01）.
[6]汪素岩，王健，孟铮.制霉素中制霉菌素A1、A3和多真菌素B含量比例的研究[J].中国药事，1996（01）.
关键词：制霉素；质量；稳定性
制霉素为黄色或棕黄色粉末；有类似谷物气味，有引湿性，对光，空气，酸和碱均不稳定。制霉素主要用于内服治疗消化道真菌感染或外用于表面皮肤真菌感染，如新型隐球菌、曲菌、毛霉菌、小孢子菌、荚膜组织浆胞菌、皮炎芽生菌及皮肤癣菌等[1-5]。搽剂最早出现于我国现存最早的出土于马王堆汉墓的古医方《五十二病方》，在我国有着悠久的历史。本实验研究制霉素搽剂质量控制与稳定性。
1 仪器与试药
1.1 仪器：长城狮鼎SHB-III型台式循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；XH-2008DE智能温控双频超声波萃取仪（北京祥鹄科技发展有限公司）；600220液相保护柱（天津琛航科苑科技发展有限公司）；GX-2050高温循环器（上海市百典仪器厂）；JY-M-800S恒温恒湿试验箱价格（上海巨怡环境试验设备有限公司）；电子分析天平（上海魅宇仪器设备有限公司）；GI-3000-12二元高压梯度液相色谱仪（通用（深圳）仪器有限公司）；GENESYS180紫外可见分光光度计（上海力晶科学仪器有限公司）；兰博OV3000大容量柱温箱（天津市兰博实验仪器设备有限公司）。
1.2 色谱柱：安捷伦十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（218mm×4.6mm，5μm）。
1.3 对照品：制霉素 购自中国药品生物制品检定所。
1.4 试剂：甲醇（北京天安联合科技有限公司）、冰醋酸（上海玻尔化学试剂有限公司）磷酸氢二钠（北京天安联合科技有限公司）、磷酸（北京天安联合科技有限公司）、醋酸钠（北京天安联合科技有限公司）、乙腈（北京天安联合科技有限公司）。
2 稳定性考察方法
将本品置于30℃的恒温箱内，分别于第1、2、3、4、5、6个月末取样并测定，考察外观、生物限度、含量的测定结果做比较。另取样品在冷处保存，分别于第1、2、3、4、5、6个月末取样并测定，考察外观、生物限度、含量的测定结果做比较。
3 质量控制
3.1 性状
本品为黄色或淡棕色黏稠性混悬液。符合《中国药典》2015年版对搽剂的要求。
3.2 含量测定
3.2.1 流动相的选择。分别考察0.01mol/L磷酸氢二钠-磷酸缓冲液（p H=2.2）-水（80：20）；醋酸钠缓冲液（PH4.4）-甲醇（40∶60）；醋酸钠缓冲液（PH4.4）-乙腈（40∶60）；醋酸钠缓冲液（PH4.4）-乙腈（50∶50）；乙腈-0.2%（质量分数）磷酸（体积比25：75）；醋酸钠缓冲液（PH4.4）-乙腈（40∶60）不同比例的流动相，结果以醋酸钠缓冲液（PH4.4）-乙腈（40∶60）；为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用醋酸钠缓冲液（PH4.4）-乙腈（40∶60）为流动相。依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[6]。流动相：醋酸钠缓冲液（PH4.4）-乙腈（40∶60），检测波长：306nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。理论板数按制霉素峰计算应不得低于2000。
3.2.2 对照品溶液的制备
精密称取制霉素对照品适量，置容量瓶中，加甲醇制成每1mL含100μg的溶液，即得。
3.2.3 供試品溶液的制备
取适量供试品精密称定，置具小烧杯中，精密加入甲醇10mL，用甲醇转移至50ml容量瓶中并稀释定容，超声处理5分钟，放冷，滤过。取续滤液，即得。
3.2.4 专属性试验
依照处方取除制霉素，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照3.2.4项下供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在制霉素出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
3.2.5 精密度试验
精密称取制霉素对照品适量，加甲醇使溶解，制成浓度为100μg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.73%，表明本方法精密度良好。
3.2.6 对照品的线性考察
精密称取制霉素对照品50mg，置100ml容量瓶中，加入甲醇溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取1、2、3、4、5mL，置于10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照3.2.2项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果表明，制霉素在50～250μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
3.2.7 重现性试验
称取同一批的制霉素搽剂样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.81%，结果表明此方法的重现性良好。
3.2.8 准确度试验
精密称取已知含量的样品6份，分别加入一定量的制霉素对照品，上述方法进行测定，计算回收率，平均回收率为99.5%，RSD=0.76%，结果表明样品加样回收率良好。
3.3 微生物限度检查
按照《中国药典》2015年版附录所载方法测定，结果符合规定。
4 讨论
此测定方法可用于制霉素搽剂中制霉素的含量测定。制霉素有引湿性，对光，空气，酸和碱均不稳定。所以本实验对制霉素搽剂质量控制与稳定性进行考察。30℃的恒温箱内制霉素搽剂在第二个月就开始分解。冷处保存放置3个月后，制霉素搽剂未发生明显变化。经测定发现，外观、微生物限度、含量均稳定，表明制霉素搽剂可以冷处保存3个月。
参考文献
[1]项薇薇，马小彬，刘彩双.行为干预、乳酸杆菌结合硝呋太尔制霉素治疗外阴阴道假丝酵母菌病的效果研究[J].中国美容医学，2012（18）.
[2]吴熊军.克霉唑与制霉菌素栓治疗妊娠期外阴阴道假丝酵母菌病疗效及安全性比较[J].中华医院感染学杂志，2013（06）.
[3]董雪翠，张淑玲，刘慧敏.黄苦洗液结合三维制霉素栓治疗霉菌性阴道炎疗效的临床观察[J].中国医药指南，2010（32）.
[4]张丽华.硝呋太尔制霉素阴道软胶囊治疗复发性念珠菌性外阴阴道病的疗效观察[J].海峡药学，2017（02）.
[5]谢冬艳.硝呋太尔制霉素阴道软胶囊治疗妊娠期细菌性阴道病的疗效观察[J].中国卫生标准管理，2017（01）.
[6]汪素岩，王健，孟铮.制霉素中制霉菌素A1、A3和多真菌素B含量比例的研究[J].中国药事，1996（01）.