小RNA干扰技术沉默Smoothened(Smo)基因表达对胃癌MGC803细胞增殖及凋亡的影响

来源 :中华实验外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiaollxiao
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目的观察Smo基因在胃癌MGC803细胞中的表达,及其对胃癌MGC803细胞增殖与凋亡的作用。方法半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测胃癌MGC803细胞中Smo基因的表达;化学合成3条针对Smo mRNA的小干扰RNA(siRNA),阳性脂质体介导转染胃癌MGC803细胞,半定量RT-PCR筛选出降解胃癌MGC803细胞Smo mRNA最有效的siRNA;噻唑蓝(MTT)法和流式细胞仪检测胃癌MGC803细胞Smo mRNA被降解后,对细胞增殖和凋亡率的影响。结果胃癌MGC803细胞内有Smo蛋白及Smo mRNA的强表达,siRNA-1、siRNA-2对胃癌MGC803细胞Smo基因表达均有降解作用,siRNA-1降解作用最明显,达61.7%,与隐性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。siRNA-1转染胃癌MGC803细胞24h后,细胞增殖水平较隐性对照组明显下降(P<0.05);转染48h后,细胞凋亡率较隐性对照组明显上升(P<0.05)。结论胃癌MGC803细胞内存在Smo基因的高表达,降低Smo基因表达可抑制胃癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,Smo基因具有调控胃癌细胞增殖和凋亡的作用。 Objective To observe the expression of Smo gene in gastric cancer MGC803 cells and its effect on the proliferation and apoptosis of gastric cancer MGC803 cells. Methods Semi-quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) and Western blot were used to detect the expression of Smo gene in gastric cancer MGC803 cells. Three small interfering RNAs (siRNAs) targeting Smo mRNA were chemically synthesized, The mRNA of Smo mRNA in gastric cancer MGC803 cells was screened by semi-quantitative RT-PCR. MTT assay and flow cytometry were used to detect the proliferation and apoptosis of gastric cancer MGC803 cells after they were degraded Rate of impact. Results Smo protein and Smo mRNA were strongly expressed in gastric cancer MGC803 cells. SiRNA-1 and siRNA-2 had a significant effect on the expression of Smo gene in gastric cancer MGC803 cells. The degradation of Smo gene was the most significant (61.7%) The difference was statistically significant (P <0.05). After transfection with siRNA-1 for 24 h, the proliferation of gastric cancer MGC803 cells was significantly lower than that of the recessive control group (P <0.05). After 48 hours of transfection, the apoptosis rate of siRNA-1 was significantly higher than that of the recessive control group (P <0.05). Conclusion The Smo gene is highly expressed in gastric cancer MGC803 cells. Decreasing the expression of Smo gene can inhibit the proliferation of gastric cancer cells and induce apoptosis. Smo gene can regulate the proliferation and apoptosis of gastric cancer cells.
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