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目的：建立大鼠肝窦内皮细胞（SEC）的分离培养的方法，观察SEC体外培养的生长特点。方法通过门静脉插管进行胶原酶原位灌注，结合离体消化、Percoll密度梯度离心法分离SEC；应用Ⅷ因子和CD14间接免疫荧光法观察SEC表面分子的表达进行细胞鉴定；应用光学显微镜、电子显微镜、并首次使用原子力显微镜（AFM）观察体外培养状态下SEC的超微结构及形态学变化。结果 SEC获得率为每只大鼠（2.95±0.31）×107，细胞活力好。免疫荧光法鉴定CD14阳性率约达99%，Ⅷ因子相关抗原抗体阳性率约为2%。光学显微镜下观察，细胞形态变化典型，并持续增殖。电子显微镜下观察到细胞典型的由成簇窗孔组成的筛板样结构；AFM下实现了对SEC的三维结构的观察，细胞骨架清晰。结论高纯度、活力好的SEC的成功培养及体外生长规律的观察，为研究SEC在肝脏生理病理过程中作用提供了前提条件。