实时荧光定量PCR筛选有效RNA干扰方法的建立

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目的 建立一种利用实时荧光定量聚合酶链反应(RT—QPCR)技术检测RNA干扰(RNAi)效果的方法,为筛选有效的RNAi提供一种科学、可靠的实验方法。方法选用质粒载体pavu6.127构建的3个携带NCOA3基因干扰序列和一个阴性对照序列的重组质粒,转染ECA109细胞,培养48h,在荧光显微镜下观察荧光细胞的数目,计算转染效率,然后收集细胞提取总RNA,RT—QPCR检测各组转染细胞NCOA-3基因rnRNA表达量,从而计算各组的干扰效率。结果相对于A组未转染细胞,各组mRNA表达量分别为B组101.
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