【摘 要】
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目的 探究miR-1247通过靶向CC趋化因子配体16(CC chemokine ligand 16,CCL16)调控肺炎幼鼠巨噬细胞极化和过敏性炎症的机制.方法 BALB/C幼鼠维持在特定的无病原体条件下的医学院动物设施中.所有实验使用年龄和性别匹配的对照小鼠.实验分为3组:对照组(在指定的时间段内给予PBS,1 mg/kg,气管内);肺炎组(在指定的时间段内给予LPS,1 mg/kg,气管内);miR-1247模拟组(气管内滴注miR-1247模拟物2 mg/kg,24 h后,在指定的时间段内给予PB
【机 构】
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442000 湖北省十堰市人民医院儿科
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目的 探究miR-1247通过靶向CC趋化因子配体16(CC chemokine ligand 16,CCL16)调控肺炎幼鼠巨噬细胞极化和过敏性炎症的机制.方法 BALB/C幼鼠维持在特定的无病原体条件下的医学院动物设施中.所有实验使用年龄和性别匹配的对照小鼠.实验分为3组:对照组(在指定的时间段内给予PBS,1 mg/kg,气管内);肺炎组(在指定的时间段内给予LPS,1 mg/kg,气管内);miR-1247模拟组(气管内滴注miR-1247模拟物2 mg/kg,24 h后,在指定的时间段内给予PBS或LPS,1 mg/kg,气管内).通过RT-PCR实时分析2组小鼠中miR-1247和CCL16 mRNA表达.荧光素酶报告基因检测miR-1247靶向CCL16.通过ELISA测量血液中凋亡蛋白[B细胞淋巴瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bax和Caspase-3]以及TNF-α,IL-6和IL-10的水平.通过流式细胞仪测量M1标记基因(iNOS和IL-1β)以及M2标记基因(Arg1和Mrc1)表达.通过蛋白质免疫印迹检测p-p38、p-p65、p-ERK和p-JNK蛋白表达水平.结果 肺炎组较对照组miR-1247 mRNA表达降低,CCL16 mRNA表达升高(P<0.05).与模拟对照组比较,miR-1247模拟组抑制了CCL163\'UTR野生型的相对荧光素酶活性(P0.05).肺炎组较对照组Bcl-2表达降低,Bax和Caspase-3表达水平升高(P<0.05),miR-1247模拟组较肺炎组Bcl-2表达升高,Bax和Caspase-3表达水平降低(P<0.05).肺炎组较对照组TNF-α和IL-6表达水平升高,IL-10表达水平降低(P<0.05),miR-1247模拟组较肺炎组TNF-α和IL-6表达水平降低,IL-10表达水平升高(P<0.05).肺炎组较对照组iNOS和IL-1β表达水平升高,Arg1和Mrc1表达水平降低(P<0.05),miR-1247模拟组较肺炎组iNOS和IL-1β表达水平降低,Arg1和Mrc1表达水平升高(P<0.05).肺炎组较对照组p-p38、p-p65、p-ERK和p-JNK蛋白表达水平升高(P<0.05),miR-1247模拟组较肺炎组p-p38、p-p65、p-ERK和p-JNK蛋白表达水平降低(P<0.05).结论 miR-1247的过表达可通过靶向CCL16减轻肺炎幼鼠巨噬细胞损伤.JNK和NF-κB通路可能是调节miR-1247在肺炎幼鼠巨噬细胞损伤中的作用的关键机制.
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