【摘 要】
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目的探索一种简便可靠、清晰的免疫组化双重标记方法 ,可用普通光学显微镜观察,并能长期保存染色结果。方法免疫组化双标中,均使用辣根过氧化物酶(HRP)连接的二抗,底物分别选
【机 构】
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盐城卫生职业技术学院神经退行性疾病与修复实验室
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目的探索一种简便可靠、清晰的免疫组化双重标记方法 ,可用普通光学显微镜观察,并能长期保存染色结果。方法免疫组化双标中,均使用辣根过氧化物酶(HRP)连接的二抗,底物分别选用二氨基联苯胺(3,3’-diaminobenzidine,DAB)和镍增强DAB。第一标DAB染色完成后切片煮沸4~5 min以灭活HRP,完全阻断交叉反应,然后进行第二标镍增强DAB染色。结果 1切片煮沸5 min,可完全灭活残余的HRP酶活性,防止染色反应交叉;5%的H2O2灭活HRP酶不完全,易产生交叉反应;短暂高温灭活HRP不损坏之前的特异性DAB染色或造成组织损伤。2第一标DAB的棕黄色与第二标镍增强DAB的紫蓝色反差大、背景低;颠倒底物使用次序将损害双标质量。此外,双标切片可采用传统的中性树胶封片,染色结果能恒久保存。结论采用同一种酶标记系统建立了简便、可靠的免疫组化双标新方法。该方法标记结果清晰、操作简便、试剂易得,有较大应用价值。
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