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摘 要 目的：检测胃腺癌患者中E-cadherin、CEA和HER-2的表达，分析其在判断预后的意义。方法：选取胃腺癌患者的手术胃癌组织蜡块标本120例为观察组，手术远端正常胃粘膜组织26例为对照组，采用组织芯片技术检测E-cadherin、CEA和HER-2的表达。结果：观察组CEA及HER-2的表达高于对照组（P<0.05）；E-cadherin的表达与组织学类型有关，CEA和HER-2的表达与组织学类型及远处转移有关，差异具有统计学意义（P<0.05）；3年生存期患者的E-cadherin、CEA、HER-2表达均明显高于5年生存期患者，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：采用组织芯片技术联合检测胃腺癌组织中E-cadherin、CEA和HER-2的表达，可用于判断患者的病情发展及预后，并为诊断和治疗提供一定的依据。
关键词 组织芯片 E-cadherin CEA HER-2 胃腺癌
中图分类号：R735.2； R730.7 文献标识码：A 文章编号：1006-1533（2015）23-0061-03
Clinical significance of the application of tissue microarray technology in the detection of the expression of E-cadherin， HER-2 and CEA in 120 cases of patients with gastric cancer*
LIAN Huojun**
（The People’s Hospital of Shangrao City， Shangrao 334000， China）
ABSTRACT Objective： To detect the expression of E-cadherin， CEA and HER-2 in gastric cancer patients， and analyze the prognostic significance. Methods： One hundred and twenty cases of tissue paraffin block specimens from patients with gastric cancer were selected as an observation group and 26 cases of distal surgical normal gastric mucosa as a control group. The expression of E-cadherin， CEA and HER-2 was detected by tissue microarray technology. Results： The expression of CEA and HER-2 in the observation group was higher than that in the control group （P<0.05）. The expression of E-cadherin was related to histological type while the expression of CEA and HER-2 was related to not only histological type but also distant metastasis （P<0.05）. The expression of CEA， HER-2 and E-cadherin in the 3 years survivals were significantly higher than that in the 5 years survivals （P<0.05）. Conclusion： The expression of E-cadherin， CEA and HER-2 in gastric carcinoma detected by tissue chip technology can be used to evaluate the condition and prognosis of patients and provide a basis for diagnosis and treatment.
KEY WORDS tissue microarray； E-cadherin； CEA； HER-2； gastric adenocarcinoma
胃癌是全世界最常见的恶性肿瘤之一，由于多数胃癌在确诊时处于晚期或已出现较大范围的局部侵袭甚至转移，导致预后不良。胃癌的转移是众多因子相互协调以及共同作用的结果，其形成是由数个基因改变累积的多步骤过程组成。寻找和检测胃癌发生、发展和预后的分子标志物能对这些患者起指导治疗和监测作用。本研究采用组织芯片技术，观察胃腺癌中E-cadherin、HER-2基因扩增、CEA在胃腺癌中的表达，并探讨其与组织类型，浸润转移之间的关系。
1 资料和方法
1.1 一般资料
选取我院2013年4月-2015年4月收治的胃腺癌患者120例，均经术后病理检查确诊。术前均未行放疗和化疗。其中男89例，女31例；年龄27～75岁，平均（57.84±6.83）岁；肿瘤部位：胃窦63例，胃体29例，胃底贲门22例，多个部位6例；分化程度：高分化21例，中分化35例，低分化64例；组织学类型：管状腺癌102例，乳头状腺癌6例，黏液腺癌13例；浸润程度：黏膜及其下层87例，肌层21例，浆膜层12例；转移情况：淋巴结及外周器官转移31例，无淋巴转移86例；TNM分期：IA期58例，IB期19例，Ⅱ期16例，IIIA期6例，ⅢB期21例。选取患者手术切除胃癌组织蜡块标本120例为观察组，同时选取手术远端正常胃黏膜组织26例为对照组。 1.2 组织芯片设计和制作
根据观察组及对照组所选标本数，每例取2个组织芯片，每个含有60例胃腺癌和13例正常组织，共做成4个组织芯片。预先制作4个受体模块，大小为25 mm×25 mm×20 mm，孔径10 mm，排成12×7点组织微列阵。将选取标本重新切片，HE染色。再在组织蜡块上准确标记所需的靶点。用穿刺针将标记好的供体组织取出组织芯，转移到受体模块相应的位置，将制成的组织芯片蜡块面朝下放在铜板上，并轻压蜡块使组织芯片排平，冷却后再放连续切片，厚约4 μm，捞片后于58 ℃过夜，置于冰箱储存备用。
1.3 观察指标
采用免疫组化PV-6000二步法检测上皮细胞钙黏蛋白（E-cadherin）和癌胚抗原（CEA）水平，试剂盒购自广州深达公司；荧光原位杂交技术检测人表皮生长因子受体2（HER-2）基因扩增，探针购自北京金菩嘉。检测方法严格按照说明书操作，
1.4 判定指标
免疫组化染色结果判定标准参照文献[1]。染色强度评分：无着色0分，浅黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分。阳性率评分：0%为0分，<5%为1分，5～50%为2分，>50%为3分。染色结果根据染色强度和阳性率分数相加所得积分，其中阴性（-）：≤2分、阳性（+）：3～4分，强阳性（++）：5～6分。荧光原位杂交判定标准参照文献[2]：选择HER-2扩增程度最高的区域计数至少10个肿瘤细胞核中的双色信号，统计红色信号总数与绿色信号总数的比值，当比值<2.0则视为（-），当比值≥2.0或细胞内出现成簇的异常信号聚集均视为（+）。
1.5 统计学处理
采用SPSS 13.0软件分析数据。计数资料采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组患者各项指标表达情况比较
观察组中CEA及HER-2的表达高于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）。两组患者的E-cadherin的表达差异无统计学意义（P>0.05，表1）。
2.2 各项指标表达与临床病理特征的关系
E-cadherin的表达与组织学类型有关，CEA和HER-2的表达与组织学类型及远处转移有关，差异具有统计学意义（P<0.05，表2）。
2.3 各项指标表达与生存率的关系
3年生存期患者的E-cadherin、CEA和HER-2表达均明显高于5年生存期患者，差异具有统计学意义（P<0.05，表3）。
3 讨论
本研究中所采用的组织芯片技术具有体积小、信息含量高等优点，操作在同一张玻片上进行，在最大程度上保持一致，减小实验误差，准确性高。且组织芯片技术根据不同研究的需要可进行组合或重新设计，通过一次性实验即可获大量结果[3-4]。
E-cadherin属于钙依赖性细胞黏附分子，是肿瘤转移抑制基因，其在正常上皮表达，而在胃癌组织中的表达降低。E-cadherin敏感性比CEA高，高水平的可溶性E-cadherin可以预测根治性切除术后胃癌患者的预后[5]。相关研究表明，E-cadherin的表达与分型、淋巴结转移、分化程度和淋巴管浸润有关，如其在分化好的胃腺癌组织中的表达下降，应考虑存在淋巴结转移[6]。本研究表明E-cadhefin仅与组织学类型有关，而与其他临床病理特征无关。
CEA是具有人类胚胎抗原决定簇的一种酸性糖蛋白、目前最常见的用于胃癌检测的肿瘤标志物，由胃肠道分泌细胞产生。共存于胚胎结肠和结肠腺癌组织中，而在正常结肠组织中缺乏[7-8]。HER-2是定位于人类染色体的原癌基因，其主要参与细胞间的信号传导，调节细胞生长、分化和增殖[9]。现有研究表明，HER-2在恶性肿瘤中扩增和过表达与肿瘤的发生、发展整个过程及预后差有关，并用来作为预测患者对化疗和内分泌的治疗效果[10]。本研究采用组织芯片技术检测胃腺癌患者E-cadherin、CEA和HER-2的表达水平，结果显示CEA和HER-2的表达与组织学类型及远处转移有关，且3年生存期患者的E-cadherin、CEA和HER-2的表达均明显高于5年生存期患者，差异具有统计学意义（P<0.05），表明 HER-2结合CEA可以作为预测胃腺癌患者预后不良的重要指标。
综上，采用组织芯片技术检测胃腺癌组织中E-cadherin、CEA和HER-2的表达水平，可用于判断患者的病情发展及预后，可为诊断和治疗提供一定的依据。
参考文献
[1] Guo HB， Lee I， Kamar M， et al. Aberrant N-glycosylation of beta1 integrin causes reduced alpha5 beta1 integrin clustering and stimulates cell migration[J]. Cancer Res， 2002， 62（23）： 6837-6845.
[2] 《胃癌HER-2检测指南》编写组. 胃癌HER-2检测指南[J]. 中华病理学杂志， 2011， 40（8）： 553-557.
[3] 成军.肿瘤相关基础[M]. 北京： 北京医科大学出版社， 2000： 1.
[4] 张伟. 组织芯片检测胃癌及癌前病变中错配修复基因MSH2的表达及意义[J]. 临床消化病杂志， 2013， 25（4）： 198-200.
[5] 薛松. E-cadherin在胃癌浸润与转移中作用的研究进展[J].临床肿瘤学杂志， 2015， 20（6）： 555-558.
[6] Chan AO， Chu KM， Lam SK， et a1. Early prediction of tumor recurrence after curative resection of gastric carcinoma by measuring soluble E-cadherin[J]. Cancer， 2005， 104（4）： 740-746.
[7] 吴平辉， 徐芳， 冯起放， 等. 血清CEA、VEGF-C、Chemerin水平与胃癌预后的关系[J]. 江西医药， 2015， 50（7）： 652-654.
[8] 杨会生， 王韩， 汤宛莹， 等. 联合检测CA724、CA199、CEA对胃癌诊断价值的Meta分析[J]. 肿瘤学杂志， 2015， 21（9）： 714-720.
[9] 廖志东， 郑少秋， 匡亚玲， 等. HER-2、HIF-1a、GLUT-1及在VEGF表达在乳腺浸润性导管癌淋巴结转移中作用[J]. 临床与实验病理学杂志， 2012， 28（1）： 22-25.
[10] 周明星. CD147、HER-2蛋白表达与胃癌侵袭转移的关系[J]. 临床与实验病理学杂志， 2013， 29（11）： 1250-1252.
关键词 组织芯片 E-cadherin CEA HER-2 胃腺癌
中图分类号：R735.2； R730.7 文献标识码：A 文章编号：1006-1533（2015）23-0061-03
Clinical significance of the application of tissue microarray technology in the detection of the expression of E-cadherin， HER-2 and CEA in 120 cases of patients with gastric cancer*
LIAN Huojun**
（The People’s Hospital of Shangrao City， Shangrao 334000， China）
ABSTRACT Objective： To detect the expression of E-cadherin， CEA and HER-2 in gastric cancer patients， and analyze the prognostic significance. Methods： One hundred and twenty cases of tissue paraffin block specimens from patients with gastric cancer were selected as an observation group and 26 cases of distal surgical normal gastric mucosa as a control group. The expression of E-cadherin， CEA and HER-2 was detected by tissue microarray technology. Results： The expression of CEA and HER-2 in the observation group was higher than that in the control group （P<0.05）. The expression of E-cadherin was related to histological type while the expression of CEA and HER-2 was related to not only histological type but also distant metastasis （P<0.05）. The expression of CEA， HER-2 and E-cadherin in the 3 years survivals were significantly higher than that in the 5 years survivals （P<0.05）. Conclusion： The expression of E-cadherin， CEA and HER-2 in gastric carcinoma detected by tissue chip technology can be used to evaluate the condition and prognosis of patients and provide a basis for diagnosis and treatment.
KEY WORDS tissue microarray； E-cadherin； CEA； HER-2； gastric adenocarcinoma
胃癌是全世界最常见的恶性肿瘤之一，由于多数胃癌在确诊时处于晚期或已出现较大范围的局部侵袭甚至转移，导致预后不良。胃癌的转移是众多因子相互协调以及共同作用的结果，其形成是由数个基因改变累积的多步骤过程组成。寻找和检测胃癌发生、发展和预后的分子标志物能对这些患者起指导治疗和监测作用。本研究采用组织芯片技术，观察胃腺癌中E-cadherin、HER-2基因扩增、CEA在胃腺癌中的表达，并探讨其与组织类型，浸润转移之间的关系。
1 资料和方法
1.1 一般资料
选取我院2013年4月-2015年4月收治的胃腺癌患者120例，均经术后病理检查确诊。术前均未行放疗和化疗。其中男89例，女31例；年龄27～75岁，平均（57.84±6.83）岁；肿瘤部位：胃窦63例，胃体29例，胃底贲门22例，多个部位6例；分化程度：高分化21例，中分化35例，低分化64例；组织学类型：管状腺癌102例，乳头状腺癌6例，黏液腺癌13例；浸润程度：黏膜及其下层87例，肌层21例，浆膜层12例；转移情况：淋巴结及外周器官转移31例，无淋巴转移86例；TNM分期：IA期58例，IB期19例，Ⅱ期16例，IIIA期6例，ⅢB期21例。选取患者手术切除胃癌组织蜡块标本120例为观察组，同时选取手术远端正常胃黏膜组织26例为对照组。 1.2 组织芯片设计和制作
根据观察组及对照组所选标本数，每例取2个组织芯片，每个含有60例胃腺癌和13例正常组织，共做成4个组织芯片。预先制作4个受体模块，大小为25 mm×25 mm×20 mm，孔径10 mm，排成12×7点组织微列阵。将选取标本重新切片，HE染色。再在组织蜡块上准确标记所需的靶点。用穿刺针将标记好的供体组织取出组织芯，转移到受体模块相应的位置，将制成的组织芯片蜡块面朝下放在铜板上，并轻压蜡块使组织芯片排平，冷却后再放连续切片，厚约4 μm，捞片后于58 ℃过夜，置于冰箱储存备用。
1.3 观察指标
采用免疫组化PV-6000二步法检测上皮细胞钙黏蛋白（E-cadherin）和癌胚抗原（CEA）水平，试剂盒购自广州深达公司；荧光原位杂交技术检测人表皮生长因子受体2（HER-2）基因扩增，探针购自北京金菩嘉。检测方法严格按照说明书操作，
1.4 判定指标
免疫组化染色结果判定标准参照文献[1]。染色强度评分：无着色0分，浅黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分。阳性率评分：0%为0分，<5%为1分，5～50%为2分，>50%为3分。染色结果根据染色强度和阳性率分数相加所得积分，其中阴性（-）：≤2分、阳性（+）：3～4分，强阳性（++）：5～6分。荧光原位杂交判定标准参照文献[2]：选择HER-2扩增程度最高的区域计数至少10个肿瘤细胞核中的双色信号，统计红色信号总数与绿色信号总数的比值，当比值<2.0则视为（-），当比值≥2.0或细胞内出现成簇的异常信号聚集均视为（+）。
1.5 统计学处理
采用SPSS 13.0软件分析数据。计数资料采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组患者各项指标表达情况比较
观察组中CEA及HER-2的表达高于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）。两组患者的E-cadherin的表达差异无统计学意义（P>0.05，表1）。
2.2 各项指标表达与临床病理特征的关系
E-cadherin的表达与组织学类型有关，CEA和HER-2的表达与组织学类型及远处转移有关，差异具有统计学意义（P<0.05，表2）。
2.3 各项指标表达与生存率的关系
3年生存期患者的E-cadherin、CEA和HER-2表达均明显高于5年生存期患者，差异具有统计学意义（P<0.05，表3）。
3 讨论
本研究中所采用的组织芯片技术具有体积小、信息含量高等优点，操作在同一张玻片上进行，在最大程度上保持一致，减小实验误差，准确性高。且组织芯片技术根据不同研究的需要可进行组合或重新设计，通过一次性实验即可获大量结果[3-4]。
E-cadherin属于钙依赖性细胞黏附分子，是肿瘤转移抑制基因，其在正常上皮表达，而在胃癌组织中的表达降低。E-cadherin敏感性比CEA高，高水平的可溶性E-cadherin可以预测根治性切除术后胃癌患者的预后[5]。相关研究表明，E-cadherin的表达与分型、淋巴结转移、分化程度和淋巴管浸润有关，如其在分化好的胃腺癌组织中的表达下降，应考虑存在淋巴结转移[6]。本研究表明E-cadhefin仅与组织学类型有关，而与其他临床病理特征无关。
CEA是具有人类胚胎抗原决定簇的一种酸性糖蛋白、目前最常见的用于胃癌检测的肿瘤标志物，由胃肠道分泌细胞产生。共存于胚胎结肠和结肠腺癌组织中，而在正常结肠组织中缺乏[7-8]。HER-2是定位于人类染色体的原癌基因，其主要参与细胞间的信号传导，调节细胞生长、分化和增殖[9]。现有研究表明，HER-2在恶性肿瘤中扩增和过表达与肿瘤的发生、发展整个过程及预后差有关，并用来作为预测患者对化疗和内分泌的治疗效果[10]。本研究采用组织芯片技术检测胃腺癌患者E-cadherin、CEA和HER-2的表达水平，结果显示CEA和HER-2的表达与组织学类型及远处转移有关，且3年生存期患者的E-cadherin、CEA和HER-2的表达均明显高于5年生存期患者，差异具有统计学意义（P<0.05），表明 HER-2结合CEA可以作为预测胃腺癌患者预后不良的重要指标。
综上，采用组织芯片技术检测胃腺癌组织中E-cadherin、CEA和HER-2的表达水平，可用于判断患者的病情发展及预后，可为诊断和治疗提供一定的依据。
参考文献
[1] Guo HB， Lee I， Kamar M， et al. Aberrant N-glycosylation of beta1 integrin causes reduced alpha5 beta1 integrin clustering and stimulates cell migration[J]. Cancer Res， 2002， 62（23）： 6837-6845.
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[6] Chan AO， Chu KM， Lam SK， et a1. Early prediction of tumor recurrence after curative resection of gastric carcinoma by measuring soluble E-cadherin[J]. Cancer， 2005， 104（4）： 740-746.
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[9] 廖志东， 郑少秋， 匡亚玲， 等. HER-2、HIF-1a、GLUT-1及在VEGF表达在乳腺浸润性导管癌淋巴结转移中作用[J]. 临床与实验病理学杂志， 2012， 28（1）： 22-25.
[10] 周明星. CD147、HER-2蛋白表达与胃癌侵袭转移的关系[J]. 临床与实验病理学杂志， 2013， 29（11）： 1250-1252.