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目的
制备针对流感病毒基质蛋白M1的单克隆抗体(mAb),为研究流感病毒检测试剂盒提供实验材料。
方法以纯化的M1蛋白为免疫原,免疫Balb/c小鼠,将其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,筛选出分泌抗M1 mAb的杂交瘤细胞,注射小鼠腹腔获得M1 mAb,并用辣根过氧化物酶(HRP)标记M1 mAb。通过Western印迹法、ELISA、细胞感染免疫染色实验检测所获M1 mAb的作用和特性。
结果获得能稳定分泌抗流感病毒基质蛋白M1的杂交瘤细胞系,纯化腹水得到M1 mAb和HRP-M1 mAb。Western印迹法结果显示,M1 mAb和HRP-M1 mAb能与M1抗原及H1N1、H3N2亚型流感病毒的M1蛋白反应,是针对M1蛋白的mAb;利用ELISA方法研究M1 mAb和HRP-M1 mAb对M1抗原及流感病毒的检测作用,结果显示它们能检测H1N1和H3N2亚型的甲型流感病毒,而HRP-M1 mAb的检测能力比M1 mAb强;细胞免疫染色实验显示,M1 mAb能结合H1N1和H3N2亚型病毒感染的细胞。
结论针对M1蛋白的M1 mAb和HRP-M1 mAb已制备成功。它们能检测H1N1和H3N2亚型甲型流感病毒,有望应用于流感病毒诊断以及鉴别诊断试剂盒的研发。