【摘 要】
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目的:通过建立多种5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的人结肠癌细胞株,探讨耐药的结肠癌细胞的生物学特性与耐药机制.方法:选用人结肠癌HT-29、LoVo和SW480细胞,通过高浓度5-FU反复接触
【机 构】
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武汉大学同仁医院/武汉市第三医院消化内科,湖北武汉,430061
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目的:通过建立多种5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的人结肠癌细胞株,探讨耐药的结肠癌细胞的生物学特性与耐药机制.方法:选用人结肠癌HT-29、LoVo和SW480细胞,通过高浓度5-FU反复接触结合药物浓度递增法建立耐药株HT-29/5-FU、LoVo/5-FU和SW480/5-FU.不同浓度5-FU作用所建立的耐药细胞株及其亲本细胞后,分别用MTT法、流式细胞术、qRT-PCR、Western blot检测细胞对5-FU的敏感性、周期分布、耐药相关分子[P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、ATP结合盒超家族G成员2(ABCG2)]及第十号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)与蛋白激酶B(Akt)的mRNA和蛋白的表达,并用Akt活性检测试剂盒检测细胞Akt活性.结果:与各自的亲本细胞比较,构建的HT-29/5-FU、LoVo/5-FU和SW480/5-FU对5-FU的IC50均明显升高(均P＜0.05),耐药指数分别为7.213、5.849和15.940.随着5-FU处理浓度的升高,亲本细胞和耐药细胞G0/G1期细胞数量均明显增加(均P＜0.05),但同一浓度5-FU处理下,各耐药株G0/G1期细胞数量均明显少于其对应亲本株(均P＜0.05).与各自的亲本细胞比较,对应耐药株的P-gp、MRP1、ABCG2、Akt的mRNA和蛋白表达水平均明显升高,而PTEN表达均明显降低(均P＜0.05),且Akt活性均明显提高(均P＜0.05).结论:成功建立了结肠癌5-FU耐药细胞株,其耐药机制可能与PTEN下调所致的PI3K/Akt降低PI3K/Akt通路活化有关.
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