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目的
探讨NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎性体在大鼠正常脑组织中的表达及在脑缺血-再灌注损伤中的作用。
方法先取健康成年雄性SD大鼠40只,按随机数字表法随机分为假手术组,再灌注12、24、48 h组,每组10只。采用大脑中动脉栓塞法构建脑缺血(2 h)模型。免疫荧光双染色法检测正常脑组织NLRP3炎性体的表达分布,Western blot法、实时定量PCR法检测NLRP3炎性体mRNA、蛋白质的表达。再选取40只健康成年雄性SD大鼠,随机分为假手术对照组、再灌注对照组、假手术加药组、再灌注加药组,每组10只。两加药组于术前30 min经腹腔注射500 mg/kg格列苯脲,两对照组给予等量生理盐水,建模成功后24 h,对各组行颅脑MRI检查和伊文思蓝染色,观察脑组织的损伤及血-脑屏障通透性的改变。
结果健康大鼠脑组织中,NLRP3炎性体仅表达于小胶质细胞和血管内皮细胞,神经元和星形胶质细胞中未见表达。再灌注后12、24、48 h,NLRP3的mRNA和蛋白表达均明显高于假手术组(P< 0.01),且在24 h达高峰。颅脑MRI显示,再灌注加药组损伤面积明显小于再灌注对照组[(21.7±4.2)%对比(36.0±4.7)%,P< 0.01]。伊文思蓝染色显示,再灌注加药组伊文思蓝含量低于再灌注对照组[(18.7 ± 3.8)μg/g对比(32.1 ± 5.1)μg/g,P< 0.05]。
结论NLRP3炎性体仅表达于大鼠脑组织的小胶质细胞及微血管内皮细胞中,其可能通过损伤血-脑屏障参与脑缺血-再灌注损伤。