ΦC31整合酶的表达、纯化及多克隆抗体的制备

来源 :中国药科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:caicai432111
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目的:提供ΦC31整合酶研究所需的大量纯化蛋白质及特异性抗体。方法:将编码ΦC31整合酶的ORF插入到pET22b载体构建表达质粒并转化E.coliBL21(DE3),用IPTG诱导表达His-C31整合酶融合蛋白,His-BindQuick Cartridge纯化表达产物。重组蛋白作为抗原常规免疫家兔制备相应的多克隆抗体,Westernblotting确定抗体的特异性,体外线性底物分子内重组检测系统检测抗体的活性。最后用该抗体检测了ΦC31整合酶在真核细胞HEK293中的定位和分布。结果:16℃条件下O
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