[目的] 本文研究的目的在于找到软骨细胞分离的合适方法及优化冰冻保存软骨组织的配方.[方法] 来源于骨关节炎膝关节置换术的软骨标本被用于本次试验,采用300或400 u/ml Ⅱ型胶原酶(CTⅡ-1或2)进行软骨细胞体外分离,保存在不同组成的冷冻剂中,进行梯度冷却并保存在液氮中48h,随后进行软骨细胞活力及增殖潜力的测定.[结果] CTⅡ-1较CTⅡ-2更能分离出高活力的软骨细胞(P＜0.05),并且300或400 u/ml的底物酶浓度比较合适.10％ DMSO +90％ FCS是一种比较合适的冰冻保护剂,能够最大程度保留软骨细胞的增殖潜力与活力,并且毒副作用小.[结论] 通过相关的优化措施诸如软骨细胞体外分离底物酶以及冰冻保护剂的组成,从关节软骨组织中分离具有高增殖潜力的活力软骨细胞是一种可行的方法.