生物素标记文库筛选与cDNA快速终末端扩增技术克隆HRNT-1新基因

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目的:大鼠ZA73基因(GenBank accession number: AF011363)是本实验室从大鼠支气管上皮恶性转化细胞模型中采用mRNA差异显示技术克隆到的EST片段,与支气管上皮细胞恶性转化相关.根据此EST序列,克隆人全长基因.材料与方法: 运用生物素标记探针筛选人cDNA文库、将筛选基因进行cDNA快速终末端扩增(Rapid amlification of cDNA ends),直至获得全长序列.结果:HRNT-1cDNA总长4256bp,开放阅读框架2760bp,5′非编码序列253bp,3′非编码序列1240bp,已被GenBank收录于Nr数据库中( Accession number:AF223393).结论:采用生物素标记cDNA文库筛选和 cDNA快速终末端扩增相结合的技术是克隆全长cDNA快速而有效的方法,尤其适用于那些长度超过2kb的基因.
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