目的 研究靶向白细胞介素(IL)-32γ的shRNA对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖与凋亡的影响及其机制.方法 设计合成靶向IL-32γ的短发夹RNA (EASY-shRNA-IL-32γ),用脂质体法导入RA-FLS细胞中；反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法检测IL-32γ、cyclin D1及p-Akt的表达；四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞周期；TUNEL法检测细胞凋亡.采用t检验进行统计分析.结果 ①针对序列1、2和3的EASY-shRNA-IL-32γ均能有效抑制FLS的IL-32γ的表达(P＜0.01),最大抑制率分别为75.6％、66.2％和64.1％.②实验组在接种后3d[A值:(0.23±0.03)对(0.35±0.03)和(0.36±0.04),均P＜0.05]和5 d[A值:(0.27±0.03)对(0.52±0.05)和(0.53±0.04),均P＜0.01]的细胞数量明显少于对照质粒组和未转染组.③实验组处于G1期的细胞比例为[(88±6)％],较对照质粒组[(69±5)％]和未转染组[(68±4)％]显著为高(均P＜0.05)；处于S+G2期的细胞比例为[(13.6±3.0)％],较对照质粒组[(30.2±4.1)％]和未转染组[(32.1±4.3)％]显著为低(均P＜0.01).④实验组凋亡率为[(20.50±3.21)％],较对照质粒组[(9.20±0.32)％]和未转染组[(8.60±0.22)％]显著为高(均P＜0.01).⑤实验组cyclin D1和p-Akt的表达[分别为(0.36±0.04)和(0.31 ±0.03)]明显低于对照质粒组[分别为(0.59±0.08)和(0.53±0.06)]和未转染组[分别为(0.61±0.07)和(0.52±0.06),均P＜0.01].结论 靶向IL-32γ的shRNA抑制RA-FLS增殖并促进凋亡.其机制可能部分与下调cyclin D1和p-Akt的表达,从而延缓RA-FLS通过整个细胞周期和抑制其存活有关。
RNA干扰靶向沉默白细胞介素-32γ基因对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖与凋亡的影响
【摘 要】
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目的 研究靶向白细胞介素(IL)-32γ的shRNA对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖与凋亡的影响及其机制.方法 设计合成靶向IL-32γ的短发夹RNA (EASY-shRNA-IL-32γ),用脂质体法导入RA-FLS细胞中；反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法检测IL-32γ、cyclin D1及p-Akt的表达；四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖；流式细胞术
【机 构】
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430022武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院风湿免疫科,430022武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院风湿免疫科,430022武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院风湿免疫科,4300
【出 处】
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中华风湿病学杂志
【发表日期】
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2012年16期
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