建立了一种高通量液相色谱-串联质谱技术检测干血点（DBS）中同型半胱氨酸（homocycteine,Hcy）的方法。以DBS为样本,homocystine-D8为同位素内标,二硫苏糖醇（DTT）为蛋白结合态Hcy的还原剂,使用含0.1%（v/v）甲酸、0.05%（v/v）三氟乙酸的乙腈溶液萃取。整个前处理过程使用自动移液平台及96孔板实现高通量自动化操作。处理后的样本经过Phenomenex CN柱分离,使用多反应监测模式进行LC-MS/MS分析。结果表明:Hcy的检出限为0.12μmol/L（S/N=3）,定量限为0.46μmol/L（S/N=10）。Hcy在1.16¹48.00μmol/L范围内线性关系良好,R²=0.994。Hcy的平均回收率为（103.0±4.97）%^112.0±2.13%,日内相对标准偏差（RSD）为1.9%⁴.6%,日间RSD为1.5%⁷.1%。DBS样本在不同温度（-4、-20、22和37℃）下储存不同时间（0、1、2、3、4、5、6、14天）后的稳定性试验显示样本总体RSD<15%,经前处理后的样本在48 h内的稳定性试验显示样本总体RSD<5%。该方法与传统生化分析方法的相关性好（R²=0.9818,n=47）。