【摘 要】
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目的 针对Rab25基因3端非翻译区(untranslated region,3UTR)构建Rab25荧光素酶报告基因载体及突变体,为研究miR-125a-5p在肺癌耐药中调控其靶基因RAB25提供有效的工具.方法 P
【机 构】
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遵义医学院附属医院肿瘤医院暨贵州省生物治疗人才基地
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目的 针对Rab25基因3端非翻译区(untranslated region,3UTR)构建Rab25荧光素酶报告基因载体及突变体,为研究miR-125a-5p在肺癌耐药中调控其靶基因RAB25提供有效的工具.方法 PCR扩增包含Rab25的3UTR的DNA片段,克隆至荧光素酶载体GV306,构建GV306/Rab25 UTR载体;通过TrgetScan Release 6.2查找Rab25与miR-125a-5p结合区域并设计突变序列,参照构建GV306/Rab25 UTR载体方法构建GV306/Rab25 UTR突变载体.结果 通过获得Rab25与miR-125a-5p的种子区域及侧翼部分120 ～ 126 nt,并上下延伸150 bp,合成Rab25 UTR,并且在120 ～ 126 nt区域设计突变序列,构建了GV306/Rab25 3UTR及其突变载体.结论 成功构建了含Rab25基因3UTR区的荧光素酶报告基因载体及突变体,为进一步研究Rab25在非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药中的作用打下基础.
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