【摘 要】
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目的 将重组酶介导的扩增(RAA)技术与成簇的规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白13a(CRISPR-Cas 13a)检测系统相结合,建立一种快速、灵敏、特异的副溶血性弧菌检测方法(RAA-C
【机 构】
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国家卫生健康委员会肠道病原微生物重点实验室,江苏省疾病预防控制中心,江苏南京210009南开大学药学院,天津300000;天津国际生物医药联合研究院,天津300000;
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目的 将重组酶介导的扩增(RAA)技术与成簇的规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白13a(CRISPR-Cas 13a)检测系统相结合,建立一种快速、灵敏、特异的副溶血性弧菌检测方法(RAA-Cas13a).方法 样本DNA经RAA扩增后,产物采用CRISPR-Cas13a检测系统进行检测,比较CRISPR-Cas13a与琼脂糖凝胶电泳对RAA产物的检测敏感性.对方法进行灵敏度与特异度测试,通过临床样本检测比较建立的方法与real-time PCR法的一致性.结果 CRISPR-Cas13a对RAA产物的检测敏感性高于琼脂糖凝胶电泳法;建立的RAA-Cas13a方法检测副溶血性弧菌的灵敏度为10拷贝DNA分子/反应,与其他病原体之间无交叉反应,与real-time PCR对临床样本的检测阳性率差异无统计学意义(P＞0.05),二者的检测一致性较高(kappa=0.934).结论 建立的RAA-Cas13a方法具有快速简单、灵敏特异等优点,为副溶血性弧菌的快速检测提供了新的工具.
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