观察促肾上腺皮质激素(ACTH)对小鼠骨髓间充质干细胞(D1细胞系)成骨分化的影响。
方法将D1细胞分成6组，对照组、对照组+低浓度ACTH组、对照组+高浓度ACTH组、成骨组、成骨组+低浓度ACTH组、成骨组+高浓度ACTH组；各组孵育细胞6 d后通过茜素红染色法评价成骨分化；分别孵育细胞1、3、6 d后，采用聚合酶链反应(PCR)技术定量分析核心结合蛋白因子-2(Runx2)、碱性磷酸酶(ALP)、黑皮质素受体-3(MC3R)和血管内皮生长因子a(VEGFa)成骨相关基因的表达水平；孵育细胞3、6 d后，采取蛋白质印迹法(Western blot)技术分析成骨分化相关基因Runx2和骨涎蛋白(BSP)表达水平。两样本均数比较采用独立样本t检验，多样本均数比较采用单因素方差分析。
结果RT-PCR检测结果发现，第3天成骨组+高浓度ACTH(1×10-8 mol/L)组黑色素3蛋白受体(MC3R)表达(1.33±0.01)低于成骨组(1.82±0.11)，差异有统计学意义(t＝5.039，P<0.05)；第6天成骨组+高浓度ACTH(1×10-8 mol/L)组Runx2表达(0.72±0.01)低于成骨组(1.16±0.08)，差异有统计学意义(t＝5.542，P<0.05)；成骨组+高浓度ACTH(1×10-8 mol/L)组血管内皮生长因子(VEGFa)表达(0.58±0.02)显著低于成骨组(2.23±0.06)，差异有统计学意义(t＝7.238，P<0.05)；成骨组+高浓度ACTH(1×10-8 mol/L)组茜素红染色吸光度(A)值(0.270±0.012)显著低于成骨组(0.361±0.015)，差异有统计学意义(t＝4.435，P<0.05)；在蛋白水平，Runx2、BSP基因蛋白表达都有下降的趋势；成骨组+低浓度ACTH(1×10-9 mol/L)组茜素红染色A值(0.363±0.013)同成骨组(0.360±0.016)比较差异无统计学意义(t＝1.345，P>0.05)，且对成骨基因和蛋白表达作用差异无统计学意义。
结论高浓度ACTH(1×10-8 mol/L)对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化有抑制作用，而且在基因和蛋白水平对成骨特异性转录因子Runx2有明显的抑制作用。