目的设计和筛选对人PBMC细胞和小鼠脾细胞具有免疫刺激活性的Cp G ODN序列,研发能用于人用疫苗的有效核酸佐剂。方法根据具有免疫刺激活性的Cp G ODN序列结构特点,设计并合成出15条候选序列,分别合成并进行非硫代和硫代修饰。分选健康人PBMC细胞及Balb/c小鼠脾细胞,以不同Cp G ODN进行体外刺激,MTT法检测Cp G ODN诱导细胞增殖水平。随后将筛选出的有效Cp G ODN序列与人类基因组序列进行同源性比较,以评估其安全性。结果在刺激人PBMC和小鼠脾细胞72h后,硫代和非硫代修饰的15条序列A值均高于阴性对照组,其中IMB-AC5序列刺激人PBMC后A值分别达到0.377和0.334,与阳性对照ISS1018序列A值(0.387和0.338)接近;刺激小鼠脾细胞72h后,A值同样高于其他序列,达到0.571和0.486,与阳性对照ISS1018序列A值(0.588和0.464)接近。综合上述结果,选择5号非硫代序列作为候选佐剂。同源性比较结果显示,该序列与人类基因组序列没有同源性,与部分蛋白编码基因的同源性只有50%~65%,此外其部分序列与人18号染色体上的一些重复序列有同源性,最高同源性达62%。证明筛选出的新型Cp G ODN佐剂IMB-AC5安全性较高。结论设计筛选出对人PBMC细胞和小鼠脾细胞具有免疫刺激活性的Cp G ODN序列IMB-AC5,与人类基因组序列具有较低同源性,为进一步研发人用疫苗佐剂奠定基础。