奶牛 β-防御素5基因的克隆与原核表达

来源 :甘肃农业大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cyberfu
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根据已发表的β-防御素5基因序列设计引物,采用RT-PCR技术扩增奶牛白细胞β-防御素5基因片段,构建原核表达载体并进行诱导表达.结果表明:将PCR产物插入pGEM—Teasy载体后,经琼脂糖凝胶电泳、PCR、酶切及DNA测序证明构建的重组克隆载体完全正确,以该重组质粒为模板扩增目的基因的成熟肽片段,产物用EcoRI+Not I双酶切并与原核表达载体PET28a连接,获得了预期的重组表达质粒.将重组表达质粒转化到BL21(DE3)宿主菌中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达,经尿素-SDS-PAGE检
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