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目的:探讨大鼠核因子-κB (nuclear factor-κB,NF-κB)p65亚基在细胞内过表达和其活性变化对于扰素调节因子-8(interferon regulatory factor-8,IRF-8)基因启动的影响,并初步筛查IRF-8启动子上可能的p65结合元件.方法:采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增大鼠p65基因蛋白编码区(complete sequence coding,CDS)序列,将其插入到空载pIRES2-EGFP质粒中,构建大鼠野生型(wild type,WT)p65过表达质粒(pIRES2-p65 WT).在此基础上,将p65第535位丝氨酸(serine,S)突变为天冬氨酸(aspartic,D)或丙氨酸(alanine,A),分别构建p65持续活化突变型质粒(pIRES2-p65 S535D)和p65显性负性突变型质粒(pIRES2-p65 S535A).之后应用生物信息学软件预测IRF-8基因启动子区p65的结合元件,并据此构建IRF-8启动子全长(full-length,FL)和3个截短的荧光素酶报告质粒,即pGL3-IRF-8-FL(-1 892～+174 nt)、pGL3-IRF-8-1(-1 360～+174 nt)、pGL3-IRF-8-2(-752～+174 nt)和pGL3-IRF-8-3(-68 +174 nt).将上述质粒行不同组合共转染人胚肾293T(humanembryonic kidney 293T,HEK-293T)细胞,Western blot和荧光素酶实验分别检查p65的表达和IRF-8的启动子活性,并分析IRF-8启动子区可能的p65结合元件.结果:菌液PCR及测序证实上述质粒构建成功.分别将pIRES2-p65 WT、pIRES2-p65S535D、pIRES2-p65 S535A和pGL3-IRF-8-FL共转染HEK-293T,发现过表达pIRES2-p65 WT或pIRES2-p65 S535D均可明显增加IRF-8启动子活性,且以pIRES2-p65 S535D更为显著;而过表达pIRES2-p65 S535A后,IRF-8启动子活性无明显变化.将pGL3-IRF-8-FL、pGL3-IRF-8-1～3和pIRES2-p65 S535D共转染HEK-293T后发现,pGL3-IRF-8-3的启动子活性显著低于pGL3-IRF-8-FL、pGL3-IRF-8-1和pGL3-IRF-8-2,提示大鼠IRF-8启动子-752～68 nt区域可能存在p65结合元件.结论:在HEK-293T细胞内过表达野生型或持续活化突变型p65可显著促进IRF-8基因的启动,且p65与IRF-8启动子的结合元件可能位于-752～-68 nt部位.