肝细胞生长因子真核表达质粒的构建、鉴定及表达

来源 :徐州医学院学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：justoka

【摘要】

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目的克隆人肝细胞生长因子（humanhepatocytegrowthfactor，hHGF）的编码基因，构建真核表达载体，获得hHGF蛋白。方法从含hHGF的人肝脏组织总RNA中，利用RT—PCR方法扩增出hHGFcDNA；利用T

【作者】

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李德鹏桑威李振宇黄一虹张奎徐开林

【机构】

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徐州医学院附属医院血液科

【出处】

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徐州医学院学报

【发表日期】

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2012年12期

【关键词】

：

人肝细胞生长因子 TA克隆亚克隆真核表达载体 human hepatocyte growth factor TA cloning subclonin

【基金项目】

：

基金项目：国家自然科学基金（30971281）,江苏省科教兴卫工程项目（XK2007025）

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目的克隆人肝细胞生长因子（humanhepatocytegrowthfactor，hHGF）的编码基因，构建真核表达载体，获得hHGF蛋白。方法从含hHGF的人肝脏组织总RNA中，利用RT—PCR方法扩增出hHGFcDNA；利用TA克隆技术，将该基因片段克隆至真核表达载体pcDNA3．1＋质粒，转化E．coliDH5a细胞，鉴定pcDNA3．1＋-hH—GF重组质粒。将重组质粒pcDNA3．1＋-hHGF转染293T细胞，应用ELISA方法检测hHGF在293T细胞中的表达。结果①测序结果证实本实验克隆的

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