【摘 要】
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为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异株间接ELISA抗体检测方法,本研究通过RT-PCR方法扩增PEDV变异强毒株N基因并克隆至pQE30载体后进行原核表达,对表达的蛋白进行纯化和鉴定。
【机 构】
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河南农业大学牧医工程学院,河南省动物疫病预防控制中心,河南科技大学动物科技学院
【基金项目】
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河南省科技创新人才项目,豫科人组[2016]4号(174200510003),河南省科技攻关重点项目(142102310224)
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为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异株间接ELISA抗体检测方法,本研究通过RT-PCR方法扩增PEDV变异强毒株N基因并克隆至pQE30载体后进行原核表达,对表达的蛋白进行纯化和鉴定。用纯化的重组N蛋白作为包被抗原,通过矩阵法优化ELISA反应条件,建立了检测PEDV抗体的间接ELISA方法,并对其进行特异性、敏感性和重复性试验。对500份来源于不同猪场的临床血清样品进行检测,并将检测结果与进口商品化试剂盒比较。结果显示,表达的重组蛋白约为50.4 ku,western blot结果表明其反应原性良好
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