【摘 要】
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转座酶因其能够插入目的片段的能力正受到越来越多的关注,经过改造的高活性转座酶可用于标记DNA,具有较大的应用价值,如ATAC-seq (Assay for transposase-accessible chromat
【机 构】
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上海海洋大学,中国科学技术部海洋生物科学国际联合研究中心,水产科学国家级实验教学示范中心,水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室,上海,201306
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转座酶因其能够插入目的片段的能力正受到越来越多的关注,经过改造的高活性转座酶可用于标记DNA,具有较大的应用价值,如ATAC-seq (Assay for transposase-accessible chromatin using sequencing)以及TrAC-looping (Transposase-mediated analysis of chromatin looping)等染色质高级结构捕获实验,使用高活性转座酶为染色质开放区DNA或存在染色质相互作用的片段加上标记,从而分离出目的片段.天然转座酶普遍活性较低,缺乏实际应用价值,而经过改造的高活性转座酶因其可能导致的致死突变,对宿主具有较大毒性,难以制备.本研究优化了高活性转座酶Tn5的原核表达以及纯化方法,将已转化petl 5b His6Tn5质粒的改良型工程菌BL21-Gold (DE3)以及毒性蛋白诱导条件进行原核表达,借助高活性转座酶Tn5带有的Histag标签进行纯化,通过Western blotting鉴定了纯化所得蛋白,并使用考马斯亮蓝染色测定了目的蛋白浓度,采取在标准反应条件下与斑马鱼ZF4细胞基因组DNA反应的方法,测试了纯化所得Tn5的活性.本研究为进一步探测ZF4细胞基因组的三维结构提供了研究基础.
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