【摘 要】
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目的 通过电融合法制备肝癌候选标志物人vasorin(VASN)蛋白单克隆抗体并进行鉴定.方法 以人带组氨酸标签的VASN重组蛋白(VASN-His)免疫小鼠后进行细胞电融合,间接ELISA筛选能
【机 构】
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吉林医药学院吉林省抗体工程科技协同创新中心,吉林吉林市132013;吉林市园林管理中心,吉林吉林市132013;吉林铁道职业技术学院组织人事部教师发展科,吉林吉林市132013
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目的 通过电融合法制备肝癌候选标志物人vasorin(VASN)蛋白单克隆抗体并进行鉴定.方法 以人带组氨酸标签的VASN重组蛋白(VASN-His)免疫小鼠后进行细胞电融合,间接ELISA筛选能够结合天然VASN的阳性克隆.通过ELISA检测抗体的效价及亲和力、Western blot法检测抗体能否识别HepG2细胞中VASN蛋白.结果 在脾细胞与Sp2/0细胞的比例为2∶1,交变电场场强50 V 2 MHz 20 s,直流脉冲强度500 V 0.5 s时,融合率达0.31％.获得2株小鼠抗人VASN单克隆抗体(4H1和8B9),抗体最高效价为1∶256 000,亲和力最高可达到4.9×106 L/mol;2株抗体均可识别HepG2细胞的VASN蛋白.结论 运用细胞电融合法成功制备2株小鼠抗人VASN的单克隆抗体.
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