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[摘 要]目的：建立HPLC注射用盐酸表柔比星的有关物质。方法：采用色谱柱：Agela Venusil ASB C1 4.6×250mm，流动相：以乙腈-水-85%磷酸溶液（330：670：1）并含0.2%的十二烷基硫酸钠的混合溶液，流速为2.0ml/min，检测波长为254nm；柱温为40？C测定。结果：采用该方法能将杂质与主成分有效分离，专属性良好，8小时内溶液较稳定，耐用性强，经检测限试验证明该方法能有效检出杂质。结论：该方法简便，准确度高，专属性好，建议采用此法测定注射用盐酸表柔比星的有关物质。
[关键词]HPLC法 注射用盐酸表柔比星 有关物质
中图分类号：R54041 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）10-0024-01
本品用于治疗恶性淋巴瘤、乳腺癌、肺癌等癌症、白血病、膀胱内给药有助于浅表性膀胱癌、原位癌的治疗和预防其经尿道切除术后的复发。本品参照注射用盐酸表柔比星质量标准（《中国药典》2010年版二部）有关物质检查法[1]，采用药典方法部分杂质不能有效分离，本实验将色谱条件进行改进，并对此方法进行方法验证。
1.仪器与试药
1.1 仪器
Agilent 1200高效液相色谱仪，梅特勒XP26百万分之一电子天平。
1.2 试药
对照品：中国生物药品检验所；甲醇、乙腈：Dikma（色谱纯）；磷酸盐均为青岛海洋化工有限公司（分析纯）；水：哈尔滨誉衡药业股份有限公司；
2.方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Agela Venusil ASB C1 4.6×250mm，流动相：以乙腈-水-85%磷酸溶液（330：670：1）并含0.2%的十二烷基硫酸钠的混合溶液，流速为2.0ml/min；检测波长为254nm；柱温为40？C。同时取多柔比星对照品和盐酸表柔比星对照品适量，加流动相制成每1ml中分别含30μg和100μg的混合溶液，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，表柔比星峰与多柔比星峰的分离度应大于2.0。盐酸表柔比星峰的拖尾因子应在0.8～1.4。
2.2 辅料干扰试验
按处方比例配制空白辅料溶液。取供试品及空白辅料溶液各20？l，注入液相色谱仪，考察辅料及溶剂是否干扰测定。
结果，供试品溶液中各杂质峰分离度良好，各已知峰纯度均能达到999，空白辅料与溶剂均不干扰供试品杂质峰的检查，专属性良好。
2.3 检测限测定
取盐酸表柔比星、多柔比星酮、柔红霉素酮、多柔比星、盐酸柔红霉素、双氢盐酸柔红霉素、盐酸表柔红霉素对照品，配制，逐级稀释，测定各检测限分别为：145.22ng/ml、44.35ng/ml、42.67ng/ml、56.03ng/ml、195.95ng/ml、132.11ng/ml、141.15 ng/ml。此方法能有效检出样品中所含杂质。
2.4 耐用性试验
在改变检测波长、流动相比例、流速、柱温、不同型号色谱柱条件下，取系统适用性溶液，注入液相色谱仪，结果各杂质峰分离度均符合要求。
2.5 溶液稳定性试验
精密称定供试品28.37mg，置10ml量瓶中，供试品溶液在0、1、2、4、8小时考察溶液的稳定性。结果：？8小时内各杂质及盐酸表柔比星含量均无明显变化，供试品溶液在8小时内稳定性。
2.6 专属性试验
未破坏溶液：精密称取供试品24.62mg，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
热破坏溶液：精密称取供试品26.58mg，置10ml量瓶中，加2ml流动相使溶解，于100℃水浴放置9分钟，取出放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
酸破坏溶液：精密称取供试品25.66mg，置10ml量瓶中，加2ml流动相使溶解，加1mol/L盐酸溶液2ml放置2小时，加1mol/L氢氧化钠溶液2ml中和，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
光破坏溶液：精密称取供试品29.46mg，置10ml量瓶中，加4ml流动相使溶解，于光照条件下放置3天，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
氧破坏溶液：精密称取供试品31.14mg，置10ml量瓶中，加1ml10%过氧化氢放置1小时，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
碱破坏溶液：精密称取供试品30.12mg，置10ml量瓶中，加2ml流动相使溶解，加0.1mol/L氢氧化钠溶液0.5ml，室温放置1小时，加0.1mol/L盐酸溶液0.5ml中和，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
空白辅料同供试品相同方法制备。
结果：通过上述破坏试验，各条件均不同程度地产生了降解产物，各杂质峰与主峰间的分离度良好，本方法专属性强。
2.7 样品测定
取三批样品，加流动相制成每1ml中约含盐酸表柔比星0.5mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，制成每1ml中约含5μg的溶液，作为对照溶液。精密量供试品溶液和对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。结果：多柔比星分别为：0.38%，0.39%，0.38%。未知最大单杂分别为0.18%，0.19%，0.19%。雜质总和分别为0.68%，0.66%，0.65%：三批样品的杂质均能有效的检测出。
3.讨论
通过有关物质方法学验证，该方法能将杂质与主成分有效分离，专属性良好，且在8小时内溶液稳定性良好，经检测限试验证明该方法能够有效检出杂质，方法耐用性、系统适用性良好。经对三批样品的检验，结果表明三批样品均符合检查规定，该方法可用于本品有关物质检查。其专属性强、准确度高、方法简便，建议采用此法测定注射用盐酸表柔比星的有关物质。
参考文献：
[1] 《中国药典》，2010年版二部注射用盐酸表柔比星质量标准。
[关键词]HPLC法 注射用盐酸表柔比星 有关物质
中图分类号：R54041 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）10-0024-01
本品用于治疗恶性淋巴瘤、乳腺癌、肺癌等癌症、白血病、膀胱内给药有助于浅表性膀胱癌、原位癌的治疗和预防其经尿道切除术后的复发。本品参照注射用盐酸表柔比星质量标准（《中国药典》2010年版二部）有关物质检查法[1]，采用药典方法部分杂质不能有效分离，本实验将色谱条件进行改进，并对此方法进行方法验证。
1.仪器与试药
1.1 仪器
Agilent 1200高效液相色谱仪，梅特勒XP26百万分之一电子天平。
1.2 试药
对照品：中国生物药品检验所；甲醇、乙腈：Dikma（色谱纯）；磷酸盐均为青岛海洋化工有限公司（分析纯）；水：哈尔滨誉衡药业股份有限公司；
2.方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Agela Venusil ASB C1 4.6×250mm，流动相：以乙腈-水-85%磷酸溶液（330：670：1）并含0.2%的十二烷基硫酸钠的混合溶液，流速为2.0ml/min；检测波长为254nm；柱温为40？C。同时取多柔比星对照品和盐酸表柔比星对照品适量，加流动相制成每1ml中分别含30μg和100μg的混合溶液，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，表柔比星峰与多柔比星峰的分离度应大于2.0。盐酸表柔比星峰的拖尾因子应在0.8～1.4。
2.2 辅料干扰试验
按处方比例配制空白辅料溶液。取供试品及空白辅料溶液各20？l，注入液相色谱仪，考察辅料及溶剂是否干扰测定。
结果，供试品溶液中各杂质峰分离度良好，各已知峰纯度均能达到999，空白辅料与溶剂均不干扰供试品杂质峰的检查，专属性良好。
2.3 检测限测定
取盐酸表柔比星、多柔比星酮、柔红霉素酮、多柔比星、盐酸柔红霉素、双氢盐酸柔红霉素、盐酸表柔红霉素对照品，配制，逐级稀释，测定各检测限分别为：145.22ng/ml、44.35ng/ml、42.67ng/ml、56.03ng/ml、195.95ng/ml、132.11ng/ml、141.15 ng/ml。此方法能有效检出样品中所含杂质。
2.4 耐用性试验
在改变检测波长、流动相比例、流速、柱温、不同型号色谱柱条件下，取系统适用性溶液，注入液相色谱仪，结果各杂质峰分离度均符合要求。
2.5 溶液稳定性试验
精密称定供试品28.37mg，置10ml量瓶中，供试品溶液在0、1、2、4、8小时考察溶液的稳定性。结果：？8小时内各杂质及盐酸表柔比星含量均无明显变化，供试品溶液在8小时内稳定性。
2.6 专属性试验
未破坏溶液：精密称取供试品24.62mg，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
热破坏溶液：精密称取供试品26.58mg，置10ml量瓶中，加2ml流动相使溶解，于100℃水浴放置9分钟，取出放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
酸破坏溶液：精密称取供试品25.66mg，置10ml量瓶中，加2ml流动相使溶解，加1mol/L盐酸溶液2ml放置2小时，加1mol/L氢氧化钠溶液2ml中和，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
光破坏溶液：精密称取供试品29.46mg，置10ml量瓶中，加4ml流动相使溶解，于光照条件下放置3天，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
氧破坏溶液：精密称取供试品31.14mg，置10ml量瓶中，加1ml10%过氧化氢放置1小时，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
碱破坏溶液：精密称取供试品30.12mg，置10ml量瓶中，加2ml流动相使溶解，加0.1mol/L氢氧化钠溶液0.5ml，室温放置1小时，加0.1mol/L盐酸溶液0.5ml中和，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
空白辅料同供试品相同方法制备。
结果：通过上述破坏试验，各条件均不同程度地产生了降解产物，各杂质峰与主峰间的分离度良好，本方法专属性强。
2.7 样品测定
取三批样品，加流动相制成每1ml中约含盐酸表柔比星0.5mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，制成每1ml中约含5μg的溶液，作为对照溶液。精密量供试品溶液和对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。结果：多柔比星分别为：0.38%，0.39%，0.38%。未知最大单杂分别为0.18%，0.19%，0.19%。雜质总和分别为0.68%，0.66%，0.65%：三批样品的杂质均能有效的检测出。
3.讨论
通过有关物质方法学验证，该方法能将杂质与主成分有效分离，专属性良好，且在8小时内溶液稳定性良好，经检测限试验证明该方法能够有效检出杂质，方法耐用性、系统适用性良好。经对三批样品的检验，结果表明三批样品均符合检查规定，该方法可用于本品有关物质检查。其专属性强、准确度高、方法简便，建议采用此法测定注射用盐酸表柔比星的有关物质。
参考文献：
[1] 《中国药典》，2010年版二部注射用盐酸表柔比星质量标准。