人端粒酶催化亚单位hTERT基因重组腺病毒载体的构建与鉴定

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为构建人端粒酶催化亚单位(hTERT)重组腺病毒载体,采用PCR法从pCI—neo—hTERT中钓取hTERT全长cDNA,定向克隆到pADTrack—CMV穿梭质粒。通过分步转化把pADEasy-1和重组穿梭质粒(pADTrack-hTERT)转化入BJ5183菌进行同源重组。hTERT重组腺病毒骨架质粒(pAD—hTERT)转染HEK293细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,收获重组腺病毒(AD—hTERT)提取DNA行PCR鉴定并扩增。经PCR、酶切和测序鉴定证实hTERT的cDNA正
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