【摘 要】
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目的:分析在抗重组全人源化肿瘤坏死因子α单克隆抗体(TNF)治疗停药前后对幼年特发性关节炎(JIA)患者NOTCH2基因甲基化的影响.方法:应用生物信息学分析抗TNF治疗前后JIA的基因组甲基化分布.采用甲基化特异性PCR(MSP)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分别用于检测T0(抗TNF治疗前)和Tend(抗TNF治疗6周后)中NOTCH2基因的甲基化和表达情况.采用ELISA测定血中的细胞因子IL-8和IL-4浓度.收集T0组及Tend组外周血中CD4+T细胞,采用地西他宾和NOTCH2抑制剂处
【机 构】
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西安市红会医院关节外科,西安710054
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目的:分析在抗重组全人源化肿瘤坏死因子α单克隆抗体(TNF)治疗停药前后对幼年特发性关节炎(JIA)患者NOTCH2基因甲基化的影响.方法:应用生物信息学分析抗TNF治疗前后JIA的基因组甲基化分布.采用甲基化特异性PCR(MSP)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分别用于检测T0(抗TNF治疗前)和Tend(抗TNF治疗6周后)中NOTCH2基因的甲基化和表达情况.采用ELISA测定血中的细胞因子IL-8和IL-4浓度.收集T0组及Tend组外周血中CD4+T细胞,采用地西他宾和NOTCH2抑制剂处理后,采用MTT法分析了T0组和Tend组中CD4+T细胞的增殖和侵袭情况.免疫印迹法(WB)检测T0组及Tend组CD4+T细胞中NOTCH信号通路相关蛋白的表达情况.结果:与T0组相比,Tend组患儿NOTCH2基因高度甲基化,且其血中IL-8表达明显下降(P＜0.05),该结果在体外细胞实验中也得到了验证.地西他宾处理后,T0组及Tend组与NOTCH信号通路相关的NICD和HES1的表达下调,且细胞因子IL-8明显升高和IL-4明显降低;而NOTCH通路抑制剂能够逆转此现象.结论:NOTCH2甲基化与抑制NOTCH信号通路与JIA缓解密切相关,对JIA治疗起抗炎作用.
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