【摘 要】
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目的 构建人膜联蛋白A3（annexinA3）基因RNA干扰（miRNA）表达载体,体外研究其对人胆囊癌细胞SGC-996的增殖及凋亡作用.方法 构建4组针对annexinA3的pcDNATM 6.2-GW/EmGFPmiR/miRNA表达载体和1组阴性对照序列.脂质体介导瞬时转染人胆囊癌细胞株SGC-996.用RT-PCR和Western印迹检测转染前后annexinA3基因的表达.挑选干扰效率
【机 构】
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蚌埠医学院第一附属医院普外科,安徽233004,蚌埠医学院第一附属医院检验科,安徽233004,蚌埠医学院第一附属医院检验科,安徽233004,蚌埠医学院第一附属医院普外科,安徽233004,苏州大学
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目的 构建人膜联蛋白A3（annexinA3）基因RNA干扰（miRNA）表达载体,体外研究其对人胆囊癌细胞SGC-996的增殖及凋亡作用.方法 构建4组针对annexinA3的pcDNATM 6.2-GW/EmGFPmiR/miRNA表达载体和1组阴性对照序列.脂质体介导瞬时转染人胆囊癌细胞株SGC-996.用RT-PCR和Western印迹检测转染前后annexinA3基因的表达.挑选干扰效率最强的一组表达载体,以MTT法和流式细胞仪检测经miRNA干扰annexinA3对人胆囊癌细胞SGC-996的体外作用.结果 经测序鉴定,annexinA3-miRNA载体构建成功,转染人胆囊癌细胞SGC-996后荧光定量PCR和westem印迹检测显示：annexinA3基因表达及蛋白表达明显降低（P＜0.05）;干扰后细胞体外增殖缓慢,增殖明显受抑（P＜0.05）.annexinA3基因干扰对细胞周期无明显影响,但能明显增加胆囊癌细胞的凋亡（P＜0.05）.结论 AnnexinA3-miRNA表达载体能有效抑制胆囊癌SGC-996细胞annexinA3的表达,抑制肿瘤细胞生长,引起胆囊癌细胞凋亡.AnnexinA3可能是胆囊癌治疗的一个分子靶点。
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