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【摘要】 目的:建立简便、快速、灵敏、特异的转基因食品DNA检测技术。方法针对转基因技术中常用的35S启动子和NOS终止子特异基因序列设计合成特异的引物，利用基因PCR扩增技术检测植物源性转基因食品。 结果 引物对35s -f/35s -r、Nos -f/Nos -r分别成功从转基因大豆中扩增出195bp和180bp特异的DNA带。 结论 基于35S启动子和NOS终止子基因序列的PCR扩增技术是一种简便、快速、灵敏、特异的转基因食品DNA检测技术。
【关键词】转基因食品;35s启动子;Nos终止子;PCR检测
【中图分类号】R362【文献标识码】C【文章编号】1005-0515(2010)012-0002-02
随着转基因产品市场的不断拓展，转基因食品的安全性尤其是食用安全性已引起世界范围内的广泛关注[1,2]。2001年5月,我国《农业转基因生物安全条例》开始实施。2002年3月20日,与该条例配套的“农业转基因生物标识管理办法”等3个法规正式施行，要求对大豆、玉米、油菜类转基因食品必须加以标识。本文以转基因抗除草剂大豆(RoundUp ReadyTM Soybean)为材料，通过PCR方法检测转基因调控元件花椰菜花叶病毒(cauliflower mosaic virus,camv)35 s启动子和胭脂碱合酶(Dopaline syntheses,nos)终止子以筛选检测转基因食品，为市场上转基因食品的鉴定提供一种技术手段。
1 材料与方法
1.1 样品:转基因抗除草剂大豆RoundUp ReadyTM Soybean标准品购自Fluka公司。
1.2 引物:用于扩增转基因食品中花椰菜花叶病毒35s启动子的序列为35s-f：GCTCCTACAAATGCCATCA，35s -r：GATAGTGGGATTGTGCGTCA； 胭脂碱合酶NOS终止子序列为Nos -f：GAATCC TGTTGCCGGTCTTG ，Nos-r：TTATCCTAGTTTGCGCACTA。
1.3 样品核酸提取:分别采用Omega生物工程公司植物基因组核酸提取试剂盒和CTAB法制备DNA[3]。
1.4 PCR反应:25μL PCR反应体系中含：10×PCR反应缓冲液5μmol/L、10mM dNTP1µL、20μmol/L正反向引物1μmol/L、Taq DNA聚合酶0.5μmol/L、无核酸酶的蒸馏水39.5μmol/L,样品核酸2μmol/L。PCR反应按94℃变性5min，接94℃30s 60℃1min 72℃1min进行45循环，循环完成后72℃链延伸7min。扩增产物用4%琼脂糖凝胶电泳检测。
2 结果
2.1 两种方法提取DNA质量的比较:使用GMO试剂盒法和CATB两种方法都从大豆中提取了较高质量的基因组DNA，所提取的大豆样品中DNA质量无明显不同。
2.2 35s启动子、Nos终止子基因PCR扩增采用PCR方法分别对自转基因大豆和非转基因大豆中提取的基因组DNA进行扩增，结果以35s启动子基因特异引物对从转基因大豆基因组中扩增出一条195bp带，以Nos终止子基因特异的引物对从转基因大豆基因组中扩增出一条180bp带，而非转基因大豆没有扩增(图2，图3)。表明35s启动子和Nos终止子基因特异的引物对以及该PCR方法可以成功扩增35s启动子、Nos终止子基因。
3 讨论
转基因食品具有食品的属性，其检测与食用安全性评价具有重要的意义，因此本研究旨在探讨转基因食品的检测方法可行性。在转基因成分检测时，防止大量样品制备中及PCR扩增产物的交叉污染对结果的准确性有决定性作用。对于大量样品的PCR检测，研究准确的采样部位与简洁、快速的DNA提取方法，是获得正确结果的基础。农业部颁布的《转基因植物及其产品检测一大豆定性PCR方法》中规定，在大豆样品DNA提取时，少量大豆籽粒采用液氮研磨方法。本研究比较了液氮研磨法和食品加工机粉碎法，结果表明，液氮直接研磨法费时费力，且在研磨过程中样品损失较大；食品加工机粉碎法不但省时省力，且由于粉碎杯便于彻底清洁，可避免样品的交叉污染。此外使用GMO试剂盒法和CTAB两种方法都能从大豆中提取了较高质量的基因组DNA，且DNA质量无明显不同，表明CTAB法能够替代商业化转基因试剂盒提取大豆DNA。
PCR技术检测DNA具有特异性强、灵敏度高、简便快速的特点,是当前分子生物学检测的常用技术。本研究针对35S启动子和NOS终止子特异基因序列设计合成特异的引物对转基因食品进行PCR检测,快速扩增转基因食品中35S启动子和NOS终止子特异DNA片段，在转基因食品检测中具有极大的通用性，可用于转基因食品的初步筛查。
参考文献
[1]Ewen SW,Pusztai A.Effect of diets cont potatoes expressing Galanthus nivalis lec [J].Lancet,1999,354(9187):1353~13
[2] Nordlee JA,Taylor SL,Townsend JA, Brazil nut allergen in transgenic soybeans[334(11):688~692
[3] Lipp M,Brodmann P,Pietsch K,et al.IUPAC collaborative trial study of a method to detect genetically modified soybeans and maize in dried powder[J].J AOAC Int,1999,82(4):923~928
作者单位：150030 黑龙江省疾病控制中心毒理所
【关键词】转基因食品;35s启动子;Nos终止子;PCR检测
【中图分类号】R362【文献标识码】C【文章编号】1005-0515(2010)012-0002-02
随着转基因产品市场的不断拓展，转基因食品的安全性尤其是食用安全性已引起世界范围内的广泛关注[1,2]。2001年5月,我国《农业转基因生物安全条例》开始实施。2002年3月20日,与该条例配套的“农业转基因生物标识管理办法”等3个法规正式施行，要求对大豆、玉米、油菜类转基因食品必须加以标识。本文以转基因抗除草剂大豆(RoundUp ReadyTM Soybean)为材料，通过PCR方法检测转基因调控元件花椰菜花叶病毒(cauliflower mosaic virus,camv)35 s启动子和胭脂碱合酶(Dopaline syntheses,nos)终止子以筛选检测转基因食品，为市场上转基因食品的鉴定提供一种技术手段。
1 材料与方法
1.1 样品:转基因抗除草剂大豆RoundUp ReadyTM Soybean标准品购自Fluka公司。
1.2 引物:用于扩增转基因食品中花椰菜花叶病毒35s启动子的序列为35s-f：GCTCCTACAAATGCCATCA，35s -r：GATAGTGGGATTGTGCGTCA； 胭脂碱合酶NOS终止子序列为Nos -f：GAATCC TGTTGCCGGTCTTG ，Nos-r：TTATCCTAGTTTGCGCACTA。
1.3 样品核酸提取:分别采用Omega生物工程公司植物基因组核酸提取试剂盒和CTAB法制备DNA[3]。
1.4 PCR反应:25μL PCR反应体系中含：10×PCR反应缓冲液5μmol/L、10mM dNTP1µL、20μmol/L正反向引物1μmol/L、Taq DNA聚合酶0.5μmol/L、无核酸酶的蒸馏水39.5μmol/L,样品核酸2μmol/L。PCR反应按94℃变性5min，接94℃30s 60℃1min 72℃1min进行45循环，循环完成后72℃链延伸7min。扩增产物用4%琼脂糖凝胶电泳检测。
2 结果
2.1 两种方法提取DNA质量的比较:使用GMO试剂盒法和CATB两种方法都从大豆中提取了较高质量的基因组DNA，所提取的大豆样品中DNA质量无明显不同。
2.2 35s启动子、Nos终止子基因PCR扩增采用PCR方法分别对自转基因大豆和非转基因大豆中提取的基因组DNA进行扩增，结果以35s启动子基因特异引物对从转基因大豆基因组中扩增出一条195bp带，以Nos终止子基因特异的引物对从转基因大豆基因组中扩增出一条180bp带，而非转基因大豆没有扩增(图2，图3)。表明35s启动子和Nos终止子基因特异的引物对以及该PCR方法可以成功扩增35s启动子、Nos终止子基因。
3 讨论
转基因食品具有食品的属性，其检测与食用安全性评价具有重要的意义，因此本研究旨在探讨转基因食品的检测方法可行性。在转基因成分检测时，防止大量样品制备中及PCR扩增产物的交叉污染对结果的准确性有决定性作用。对于大量样品的PCR检测，研究准确的采样部位与简洁、快速的DNA提取方法，是获得正确结果的基础。农业部颁布的《转基因植物及其产品检测一大豆定性PCR方法》中规定，在大豆样品DNA提取时，少量大豆籽粒采用液氮研磨方法。本研究比较了液氮研磨法和食品加工机粉碎法，结果表明，液氮直接研磨法费时费力，且在研磨过程中样品损失较大；食品加工机粉碎法不但省时省力，且由于粉碎杯便于彻底清洁，可避免样品的交叉污染。此外使用GMO试剂盒法和CTAB两种方法都能从大豆中提取了较高质量的基因组DNA，且DNA质量无明显不同，表明CTAB法能够替代商业化转基因试剂盒提取大豆DNA。
PCR技术检测DNA具有特异性强、灵敏度高、简便快速的特点,是当前分子生物学检测的常用技术。本研究针对35S启动子和NOS终止子特异基因序列设计合成特异的引物对转基因食品进行PCR检测,快速扩增转基因食品中35S启动子和NOS终止子特异DNA片段，在转基因食品检测中具有极大的通用性，可用于转基因食品的初步筛查。
参考文献
[1]Ewen SW,Pusztai A.Effect of diets cont potatoes expressing Galanthus nivalis lec [J].Lancet,1999,354(9187):1353~13
[2] Nordlee JA,Taylor SL,Townsend JA, Brazil nut allergen in transgenic soybeans[334(11):688~692
[3] Lipp M,Brodmann P,Pietsch K,et al.IUPAC collaborative trial study of a method to detect genetically modified soybeans and maize in dried powder[J].J AOAC Int,1999,82(4):923~928
作者单位：150030 黑龙江省疾病控制中心毒理所