论文部分内容阅读
【摘要】 目的：探討角质细胞生长因子（KGF）对人龈上皮细胞在钛金属表面附着的影响效果。方法：取阻生牙拔除术患者的健康龈组织块，经过相关处理获取龈上皮细胞，将该细胞在纯钛片表面接种，在重组KGF浓度调配下处理，进而计数纯钛片表面附着的细胞数，测定纯钛片表面细胞的粘附力，比较接种后6 h、1 d、5 d、10 d、15 d时不同KGF浓度下纯钛片表面附着的龈上皮细胞数目，记录KGF浓度1 ng/mL与5 ng/mL在培养1 d、10 d时龈上皮细胞在纯钛片表面粘附力与平均荧光强度（AFI）。结果：接种后同一时间点，随着KGF浓度升高，龈上皮细胞数目明显增多（P<0.05），同一KGF浓度下，随着接种时间延长，龈上皮细胞数目明显增多（P<0.05）；KGF浓度1 ng/mL与5 ng/mL时，培养1 d与10 d时龈上皮细胞在纯钛片表面粘附力与AFI比较，差异均有统计学意义（P<0.05），培养10 d时更高。结论：随着KGF浓度升高、接种与培养时间延长，龈上皮细胞数目明显增加，而且附着力也会随着KGF浓度升高而升高，在时间-浓度变化中，AFI也呈现随之增高趋势，可见KGF对人龈上皮细胞在钛金属表面附着影响较大，需加强重视。
【关键词】 角质细胞生长因子； 人龈上皮细胞； 钛金属； 表面附着； 接种
Effects of Keratinocyte Growth Factor on Adhesion of Human Gingival Epithelial Cells on Titanium Surface/LIU Yan-feng，LI Yan-e.//Medical Innovation of China，2017，14（30）：051-054
【Abstract】 Objective：To investigate the effect of keratinocyte growth factor（KGF） on adhesion of human gingival epithelial cells on titanium surface.Method：The gingival epithelial cells were obtained from the patients with impacted teeth，and the gingival epithelial cells were obtained by related treatment，they were inoculated on the surface of pure titanium sheets，processed under the concentration of recombinant KGF，the number of cells attached to the surface of pure titanium sheets was counted，and the adhesion force of the cells on the surface of pure titanium sheets was measured.The number of gingival epithelial cells adhered to pure titanium slices at different concentrations of KGF at 6 h，1 d，5 d，10 d and 15 d after inoculation were compared，the adhesive force and average fluorescence intensity（AFI） of gingival epithelial cells on pure titanium sheets at l ng/mL and 5 ng/mL of KGF concentration at 1 d and 10 d were recorded.Result：At the same time point after inoculation，the number of gingival epithelial cells increased significantly with the increase of KGF concentration（P<0.05）.At the same KGF concentration，the data of gingival epithelial cells increased significantly with the extension of inoculation time（P<0.05）.When the concentration of KGF was 1 ng/mL and 5 ng/mL，the adhesion force and AFI of gingival epithelial cells on pure titanium surface were compared at 1 d and 10 d，the differences were statistically significant（P<0.05），and the higher at 10 d.Conclusion：With the increase of KGF concentration，inoculation and incubation time，the number of gingival epithelial cells increased significantly，and the adhesion also increased with the increase of KGF concentration，in the time-concentration change，AFI also showed a trend of increasing，it showed that KGF had a great influence on the attachment of human gingival epithelial cells on the surface of titanium，so we should pay more attention to it. 【Key words】 Keratinocyte growth factor； Human gingival epithelial cell； Titanium； Surface attachment； Inoculation
First-author’s address：Stomatological Hospital of Jiangmen City，Jiangmen 529000，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.30.015
種植体表面的上皮附着是种植牙成功的关键。阻生齿拔除后口腔表面上皮可能往牙面爬行生长，而且重新分化结合生皮，或者出现新的结合上皮，并可分泌出基底膜，形成新的上皮附着，称之为上皮再附着，组织主要源于口腔龈上皮[1-3]。随着人们对龈上皮细胞的了解增多，临床对其兴趣也逐渐增加，尤其是其在钛金属表面的附着情况[4-6]。角质细胞生长因子（KGF）被证实有着促进上皮细胞增生的效果[7-9]，为了进一步探讨KGF对人龈上皮细胞在钛金属表面附着的影响情况，本文进行了如下研究，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 细胞来源与鉴定
1.1.1 来源 选择阻生齿拔除患者健康龈组织块，利用4 ℃、0.25%分离酶进行16 h作用，分离龈上皮组织及其下结缔组织，采取0.125%胰酶消化上皮片形成一种单一的人龈上皮细胞单细胞悬液，进行体外原代培养、传代培养，每天利用倒置显微镜对其细胞形态实施观察与记录。
1.1.2 鉴定 传代培养第10天，取长龈上皮细胞的盖玻片实施抗角蛋白免疫组化染色处理，其中一抗选择1∶500的兔抗人角蛋白多克隆抗体，二抗体选择生物素标记的鼠抗兔IgG。此外，取分离酶处理前后的龈上皮组织实施HE染色，将分离酶作用后的组织采取抗角蛋白免疫组化染色。本次研究中染色必须按照细胞的形态与抗角蛋白处理，确认最终培养所得的细胞为龈上皮细胞。
1.2 细胞接种与浓度调配
1.2.1 细胞接种 将纯钛片打磨成和ITI种植体颈部光滑度相似的情况，而且表面的粗糙程度也要和ITI种植体颈部表面粗糙程度相同（采取粗糙度测量仪测定）。将消毒后备用的纯钛片放置在24孔板上进行培养。
1.2.2 浓度调配 纯钛片上接种的细胞浓度初始为1×106/mL，每片纯钛片表面滴入100 μL细胞悬液，静置2 h后将0.9 mL培养液加入其中，然后加入不同剂量的角质细胞生长因子，将细胞因子最终浓度控制在5个水平进行常规培养，包括0、1、5、10、50 ng/mL。
1.3 细胞数计数 在细胞接种后6 h、1 d、5 d、10 d、15 d将纯钛片取出，进行PBS冲洗，利用计算机图像进行系统分析，计算每平方毫米纯钛片表面黏附的细胞数目，各个时间点、不同的浓度情况下均抽取样品15个进行计数，最终数据为均值。
1.4 粘附力测定 从细胞接种开始后第1天、第10天分别将培养液取出1 ng/mL与5 ng/mL浓度的角质细胞生长因子，进行PBS冲洗后，利用细胞微管吸吮系统对单个龈上皮细胞在纯钛片上的粘附力进行测定，不同浓度下取样本5个，每个样本进行2个细胞测定。
1.5 荧光强度测定 接种第1天、第10天取培养液浓度1 ng/mL与5 ng/mL的纯钛片，实施PBS冲洗后以0.15%胰酶消化，收集细胞并调整其浓度到1×104/mL，将兔抗人层粘连蛋白单抗与鼠抗兔FITC标记荧光抗体，测定平均荧光强度（AFI），不同浓度下取样本10个。
1.6 统计学处理 采用SPSS 19.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，两两比较采用t检验，多组比较采用F检验；计数资料以率（%）表示，比较采用 字2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 不同时间、不同KGF浓度下纯钛片表面人龈上皮细胞附着数目比较 接种后同一时间点，随着KGF浓度升高，龈上皮细胞数目明显增多（P<0.05），同一KGF浓度下，随着接种时间延长，龈上皮细胞数目明显增多（P<0.05），见表1。
2.2 龈上皮细胞在KGF浓度1 ng/mL与5 ng/mL时培养1 d与10 d时纯钛片表面粘附力与AFI比较 KGF浓度1 ng/mL与5 ng/mL时培养1 d与10 d时龈上皮细胞在纯钛片表面粘附力与AFI比较，差异均有统计学意义（P<0.05），培养10 d时更高，见表2。
3 讨论
1987年国外学者提出表面赛跑理论，指出组织细胞与细菌在生物材料表面会出现竞争性附着，若组织细胞先附着在生物材料表面，则组织-材料界面则是由完整细胞膜、细胞活力、多糖、宿主功能性防御抵抗细菌进行粘附，反之若细菌先附着，则会诱发感染，而且细胞难以再与生物材料附着[10-13]。牙科种植体属于比较常用的方式，植入后，表面会有菌丛附着，若龈上皮细胞无法在种植体表面形成粘附，便可能造成周围炎，甚至导致种植体失败。可见，龈上皮细胞在种植体表面早期粘附是种植体成功关键，研究发现，KGF特异刺激上皮细胞的增殖与分化可能会促进其早期粘附[14-16]。
在本文中针对角质细胞生长因子对人龈上皮细胞在钛金属表面附着影响情况进行了分析，取阻生牙拔除术患者的健康龈组织块，经过相关处理获取龈上皮细胞，将该细胞在纯钛片表面接种与重组人角质细胞生长因子浓度调配下处理，进而计数纯钛片表面附着的细胞数，测定纯钛片表面细胞的粘附力，本文研究结果显示：接种后同一时间点，随着KGF浓度升高，龈上皮细胞数目明显增多（P<0.05），同一KGF浓度下，随着接种时间延长，龈上皮细胞数目明显增多（P<0.05）；KGF浓度1 ng/mL与5 ng/mL时培养1 d与10 d时龈上皮细胞在纯钛片表面粘附力与AFI比较，差异均有统计学意义（P<0.05），培养10 d时更高。角质细胞生长因子属于成纤维细胞生长因子家族成员之一，有着163个氨基酸残基的单链多肽，和靶细胞膜特异性受体结合后会发挥自身的生物学作用[17]。上皮细胞有合成与分泌角质蛋白的作用，其鉴定方法之一为抗角蛋白免疫组化染色[18]。在本次研究中细胞抗角蛋白免疫组化染色结果为阳性，细胞质呈现棕黄色，在细胞内的颗粒状（阳性）可认为是龈上皮细胞，从而使得结果更可靠。本研究结果显示，随着时间推移、浓度升高，钛金属表面附着的KGF数目会明显增多，而且附着粘附力也会增加，FAI也会升高。但在一些研究中指出，接种15 d时，随着KGF浓度升高，附着的细胞数目略微增多，显示有一定的维持增殖能力，但过度增殖会造成上皮细胞根向迁移，使得骨界面形成出现破坏，反而不利于种植体融合[19-20]。 综上所述，随着KGF浓度升高、接种与培养时间延长，龈上皮细胞数目明显增加，而且附着力也会随着KGF浓度升高而升高，在时间-浓度变化中，AFI也呈现随之增高趋势，可见KGF对人龈上皮细胞在钛金属表面附着影响较大，需加强重视。
参考文献
[1]刘建平，宋应亮，王忠义，等.人牙周膜成纤维细胞在纯钛表面附着的电镜观察[J].口腔颌面修复学杂志，2003，4（3）：155-157.
[2]谭海颂，符伟军，李健强，等.种植自体尿路上皮细胞的包膜化输尿管组织工程支架的构建[J].南方医科大学学报，2013，33（1）：48-52.
[3]陈霞，胡炜，魏万贵，等.角质细胞生长因子2对细胞生长、移行及创伤愈合的作用[J].生物化学与生物物理进展，2009，36（7）：854-862.
[4]王泽，黄鹏煌，赵海洋，等.重组人角质细胞生长因子-2对实验秃毛大鼠的毛发再生作用[J].中国药理学通报，2012，28（12）：1741-1746.
[5]宫新江，严守升，孙春艳，等.重组人角质细胞生长因子对放射性和放疗性口腔黏膜炎的防治作用[J].中国药理学与毒理学杂志，2011，25（6）：551-557.
[6]李秉航，鄧立欢，向萌娟，等.利用载有角质细胞生长因子微囊的组织工程皮肤修复裸鼠皮肤缺损[J].中国组织工程研究，2015，19（42）：6746-6752.
[7]魏美荣，李国菊，张达，等.角质细胞生长因子对口腔黏膜上皮细胞凋亡的作用研究[J].华西口腔医学杂志，2013，31（6）：565-568.
[8]吴刚，张晓健，白光.角质细胞生长因子促进大鼠胰腺导管上皮细胞体外增殖[J].基础医学与临床，2012，32（11）：1279-1283.
[9]邢爽，黄海潇，罗庆良.角质细胞生长因子对上皮细胞损伤的防护作用[J].国外医学（药学分册），2006，33（2）：97-99，122.
[10]李云，吴再峰，张健，等.角质细胞生长因子（KGF）研究进展[J].现代生物医学进展，2014，14（19）：3791-3793.
[11]邱其周，肖毅，杨永玲，等.角质细胞生长因子对高氧暴露新生大鼠肺表面活性蛋白B表达的影响[J].儿科药学杂志，2013，19（1）：1-3.
[12]宗宪磊，姜笃银，李国菊，等.角质细胞生长因子噬菌体活性肽的构建及其对表皮细胞增殖的作用[J].中华医学杂志，2013，93（14）：1058-1062.
[13]田海山，唐禄，王晓杰，等.重组人角质细胞生长因子-2基因的克隆、表达及活性[J].吉林大学学报（理学版），2011，49（6）：1150-1156.
[14]潘宣，周健，曾融生.人牙龈上皮细胞的原代和传代培养[J].广东医学，2003，24（11）：1183-1185.
[15]钟金晟，梅芳，张宏权.人牙龈结合上皮细胞和口腔龈上皮细胞生物学特性的比较[J].北京大学学报（医学版），2015，47（1）：32-36.
[16]李德懿，王丽珍，姜茜，等.人牙龈结合上皮和口腔龈上皮细胞的附着生长特性比较[J].中华口腔医学杂志，2008，43（4）：240-243.
[17]孟田甜，李新.大蒜素抑制牙龈卟啉单胞菌诱导人肺上皮细胞凋亡的作用[J].天津医药，2016，44（6）：687-690.
[18] Di C P，Sun Y，Zhao L，et al.Effect of nifedipine on the expression of keratinocyte growth factor and its receptor in cocultured/monocultured fibroblasts and keratinocytes[J].Journal of Periodontal Research，2013，48（6）：740-747.
[19] Duval C，Chagnoleau C，Pouradier F，et al.Human skin model containing melanocytes：essential role of keratinocyte growth factor for constitutive pigmentation-functional response to α-melanocyte stimulating hormone and forskolin[J].Tissue Engineering Part C Methods，2012，18（12）：947-957.
[20] Wu H，Suzuki T，Carey B，et al.Keratinocyte growth factor augments pulmonary innate immunity through epithelium-driven，GM-CSF-dependent paracrine activation of alveolar macrophages[J].Journal of Biological Chemistry，2011，286（17）：14 932-14 940.
（收稿日期：2017-09-12） （本文编辑：董悦）
【关键词】 角质细胞生长因子； 人龈上皮细胞； 钛金属； 表面附着； 接种
Effects of Keratinocyte Growth Factor on Adhesion of Human Gingival Epithelial Cells on Titanium Surface/LIU Yan-feng，LI Yan-e.//Medical Innovation of China，2017，14（30）：051-054
【Abstract】 Objective：To investigate the effect of keratinocyte growth factor（KGF） on adhesion of human gingival epithelial cells on titanium surface.Method：The gingival epithelial cells were obtained from the patients with impacted teeth，and the gingival epithelial cells were obtained by related treatment，they were inoculated on the surface of pure titanium sheets，processed under the concentration of recombinant KGF，the number of cells attached to the surface of pure titanium sheets was counted，and the adhesion force of the cells on the surface of pure titanium sheets was measured.The number of gingival epithelial cells adhered to pure titanium slices at different concentrations of KGF at 6 h，1 d，5 d，10 d and 15 d after inoculation were compared，the adhesive force and average fluorescence intensity（AFI） of gingival epithelial cells on pure titanium sheets at l ng/mL and 5 ng/mL of KGF concentration at 1 d and 10 d were recorded.Result：At the same time point after inoculation，the number of gingival epithelial cells increased significantly with the increase of KGF concentration（P<0.05）.At the same KGF concentration，the data of gingival epithelial cells increased significantly with the extension of inoculation time（P<0.05）.When the concentration of KGF was 1 ng/mL and 5 ng/mL，the adhesion force and AFI of gingival epithelial cells on pure titanium surface were compared at 1 d and 10 d，the differences were statistically significant（P<0.05），and the higher at 10 d.Conclusion：With the increase of KGF concentration，inoculation and incubation time，the number of gingival epithelial cells increased significantly，and the adhesion also increased with the increase of KGF concentration，in the time-concentration change，AFI also showed a trend of increasing，it showed that KGF had a great influence on the attachment of human gingival epithelial cells on the surface of titanium，so we should pay more attention to it. 【Key words】 Keratinocyte growth factor； Human gingival epithelial cell； Titanium； Surface attachment； Inoculation
First-author’s address：Stomatological Hospital of Jiangmen City，Jiangmen 529000，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.30.015
種植体表面的上皮附着是种植牙成功的关键。阻生齿拔除后口腔表面上皮可能往牙面爬行生长，而且重新分化结合生皮，或者出现新的结合上皮，并可分泌出基底膜，形成新的上皮附着，称之为上皮再附着，组织主要源于口腔龈上皮[1-3]。随着人们对龈上皮细胞的了解增多，临床对其兴趣也逐渐增加，尤其是其在钛金属表面的附着情况[4-6]。角质细胞生长因子（KGF）被证实有着促进上皮细胞增生的效果[7-9]，为了进一步探讨KGF对人龈上皮细胞在钛金属表面附着的影响情况，本文进行了如下研究，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 细胞来源与鉴定
1.1.1 来源 选择阻生齿拔除患者健康龈组织块，利用4 ℃、0.25%分离酶进行16 h作用，分离龈上皮组织及其下结缔组织，采取0.125%胰酶消化上皮片形成一种单一的人龈上皮细胞单细胞悬液，进行体外原代培养、传代培养，每天利用倒置显微镜对其细胞形态实施观察与记录。
1.1.2 鉴定 传代培养第10天，取长龈上皮细胞的盖玻片实施抗角蛋白免疫组化染色处理，其中一抗选择1∶500的兔抗人角蛋白多克隆抗体，二抗体选择生物素标记的鼠抗兔IgG。此外，取分离酶处理前后的龈上皮组织实施HE染色，将分离酶作用后的组织采取抗角蛋白免疫组化染色。本次研究中染色必须按照细胞的形态与抗角蛋白处理，确认最终培养所得的细胞为龈上皮细胞。
1.2 细胞接种与浓度调配
1.2.1 细胞接种 将纯钛片打磨成和ITI种植体颈部光滑度相似的情况，而且表面的粗糙程度也要和ITI种植体颈部表面粗糙程度相同（采取粗糙度测量仪测定）。将消毒后备用的纯钛片放置在24孔板上进行培养。
1.2.2 浓度调配 纯钛片上接种的细胞浓度初始为1×106/mL，每片纯钛片表面滴入100 μL细胞悬液，静置2 h后将0.9 mL培养液加入其中，然后加入不同剂量的角质细胞生长因子，将细胞因子最终浓度控制在5个水平进行常规培养，包括0、1、5、10、50 ng/mL。
1.3 细胞数计数 在细胞接种后6 h、1 d、5 d、10 d、15 d将纯钛片取出，进行PBS冲洗，利用计算机图像进行系统分析，计算每平方毫米纯钛片表面黏附的细胞数目，各个时间点、不同的浓度情况下均抽取样品15个进行计数，最终数据为均值。
1.4 粘附力测定 从细胞接种开始后第1天、第10天分别将培养液取出1 ng/mL与5 ng/mL浓度的角质细胞生长因子，进行PBS冲洗后，利用细胞微管吸吮系统对单个龈上皮细胞在纯钛片上的粘附力进行测定，不同浓度下取样本5个，每个样本进行2个细胞测定。
1.5 荧光强度测定 接种第1天、第10天取培养液浓度1 ng/mL与5 ng/mL的纯钛片，实施PBS冲洗后以0.15%胰酶消化，收集细胞并调整其浓度到1×104/mL，将兔抗人层粘连蛋白单抗与鼠抗兔FITC标记荧光抗体，测定平均荧光强度（AFI），不同浓度下取样本10个。
1.6 统计学处理 采用SPSS 19.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，两两比较采用t检验，多组比较采用F检验；计数资料以率（%）表示，比较采用 字2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 不同时间、不同KGF浓度下纯钛片表面人龈上皮细胞附着数目比较 接种后同一时间点，随着KGF浓度升高，龈上皮细胞数目明显增多（P<0.05），同一KGF浓度下，随着接种时间延长，龈上皮细胞数目明显增多（P<0.05），见表1。
2.2 龈上皮细胞在KGF浓度1 ng/mL与5 ng/mL时培养1 d与10 d时纯钛片表面粘附力与AFI比较 KGF浓度1 ng/mL与5 ng/mL时培养1 d与10 d时龈上皮细胞在纯钛片表面粘附力与AFI比较，差异均有统计学意义（P<0.05），培养10 d时更高，见表2。
3 讨论
1987年国外学者提出表面赛跑理论，指出组织细胞与细菌在生物材料表面会出现竞争性附着，若组织细胞先附着在生物材料表面，则组织-材料界面则是由完整细胞膜、细胞活力、多糖、宿主功能性防御抵抗细菌进行粘附，反之若细菌先附着，则会诱发感染，而且细胞难以再与生物材料附着[10-13]。牙科种植体属于比较常用的方式，植入后，表面会有菌丛附着，若龈上皮细胞无法在种植体表面形成粘附，便可能造成周围炎，甚至导致种植体失败。可见，龈上皮细胞在种植体表面早期粘附是种植体成功关键，研究发现，KGF特异刺激上皮细胞的增殖与分化可能会促进其早期粘附[14-16]。
在本文中针对角质细胞生长因子对人龈上皮细胞在钛金属表面附着影响情况进行了分析，取阻生牙拔除术患者的健康龈组织块，经过相关处理获取龈上皮细胞，将该细胞在纯钛片表面接种与重组人角质细胞生长因子浓度调配下处理，进而计数纯钛片表面附着的细胞数，测定纯钛片表面细胞的粘附力，本文研究结果显示：接种后同一时间点，随着KGF浓度升高，龈上皮细胞数目明显增多（P<0.05），同一KGF浓度下，随着接种时间延长，龈上皮细胞数目明显增多（P<0.05）；KGF浓度1 ng/mL与5 ng/mL时培养1 d与10 d时龈上皮细胞在纯钛片表面粘附力与AFI比较，差异均有统计学意义（P<0.05），培养10 d时更高。角质细胞生长因子属于成纤维细胞生长因子家族成员之一，有着163个氨基酸残基的单链多肽，和靶细胞膜特异性受体结合后会发挥自身的生物学作用[17]。上皮细胞有合成与分泌角质蛋白的作用，其鉴定方法之一为抗角蛋白免疫组化染色[18]。在本次研究中细胞抗角蛋白免疫组化染色结果为阳性，细胞质呈现棕黄色，在细胞内的颗粒状（阳性）可认为是龈上皮细胞，从而使得结果更可靠。本研究结果显示，随着时间推移、浓度升高，钛金属表面附着的KGF数目会明显增多，而且附着粘附力也会增加，FAI也会升高。但在一些研究中指出，接种15 d时，随着KGF浓度升高，附着的细胞数目略微增多，显示有一定的维持增殖能力，但过度增殖会造成上皮细胞根向迁移，使得骨界面形成出现破坏，反而不利于种植体融合[19-20]。 综上所述，随着KGF浓度升高、接种与培养时间延长，龈上皮细胞数目明显增加，而且附着力也会随着KGF浓度升高而升高，在时间-浓度变化中，AFI也呈现随之增高趋势，可见KGF对人龈上皮细胞在钛金属表面附着影响较大，需加强重视。
参考文献
[1]刘建平，宋应亮，王忠义，等.人牙周膜成纤维细胞在纯钛表面附着的电镜观察[J].口腔颌面修复学杂志，2003，4（3）：155-157.
[2]谭海颂，符伟军，李健强，等.种植自体尿路上皮细胞的包膜化输尿管组织工程支架的构建[J].南方医科大学学报，2013，33（1）：48-52.
[3]陈霞，胡炜，魏万贵，等.角质细胞生长因子2对细胞生长、移行及创伤愈合的作用[J].生物化学与生物物理进展，2009，36（7）：854-862.
[4]王泽，黄鹏煌，赵海洋，等.重组人角质细胞生长因子-2对实验秃毛大鼠的毛发再生作用[J].中国药理学通报，2012，28（12）：1741-1746.
[5]宫新江，严守升，孙春艳，等.重组人角质细胞生长因子对放射性和放疗性口腔黏膜炎的防治作用[J].中国药理学与毒理学杂志，2011，25（6）：551-557.
[6]李秉航，鄧立欢，向萌娟，等.利用载有角质细胞生长因子微囊的组织工程皮肤修复裸鼠皮肤缺损[J].中国组织工程研究，2015，19（42）：6746-6752.
[7]魏美荣，李国菊，张达，等.角质细胞生长因子对口腔黏膜上皮细胞凋亡的作用研究[J].华西口腔医学杂志，2013，31（6）：565-568.
[8]吴刚，张晓健，白光.角质细胞生长因子促进大鼠胰腺导管上皮细胞体外增殖[J].基础医学与临床，2012，32（11）：1279-1283.
[9]邢爽，黄海潇，罗庆良.角质细胞生长因子对上皮细胞损伤的防护作用[J].国外医学（药学分册），2006，33（2）：97-99，122.
[10]李云，吴再峰，张健，等.角质细胞生长因子（KGF）研究进展[J].现代生物医学进展，2014，14（19）：3791-3793.
[11]邱其周，肖毅，杨永玲，等.角质细胞生长因子对高氧暴露新生大鼠肺表面活性蛋白B表达的影响[J].儿科药学杂志，2013，19（1）：1-3.
[12]宗宪磊，姜笃银，李国菊，等.角质细胞生长因子噬菌体活性肽的构建及其对表皮细胞增殖的作用[J].中华医学杂志，2013，93（14）：1058-1062.
[13]田海山，唐禄，王晓杰，等.重组人角质细胞生长因子-2基因的克隆、表达及活性[J].吉林大学学报（理学版），2011，49（6）：1150-1156.
[14]潘宣，周健，曾融生.人牙龈上皮细胞的原代和传代培养[J].广东医学，2003，24（11）：1183-1185.
[15]钟金晟，梅芳，张宏权.人牙龈结合上皮细胞和口腔龈上皮细胞生物学特性的比较[J].北京大学学报（医学版），2015，47（1）：32-36.
[16]李德懿，王丽珍，姜茜，等.人牙龈结合上皮和口腔龈上皮细胞的附着生长特性比较[J].中华口腔医学杂志，2008，43（4）：240-243.
[17]孟田甜，李新.大蒜素抑制牙龈卟啉单胞菌诱导人肺上皮细胞凋亡的作用[J].天津医药，2016，44（6）：687-690.
[18] Di C P，Sun Y，Zhao L，et al.Effect of nifedipine on the expression of keratinocyte growth factor and its receptor in cocultured/monocultured fibroblasts and keratinocytes[J].Journal of Periodontal Research，2013，48（6）：740-747.
[19] Duval C，Chagnoleau C，Pouradier F，et al.Human skin model containing melanocytes：essential role of keratinocyte growth factor for constitutive pigmentation-functional response to α-melanocyte stimulating hormone and forskolin[J].Tissue Engineering Part C Methods，2012，18（12）：947-957.
[20] Wu H，Suzuki T，Carey B，et al.Keratinocyte growth factor augments pulmonary innate immunity through epithelium-driven，GM-CSF-dependent paracrine activation of alveolar macrophages[J].Journal of Biological Chemistry，2011，286（17）：14 932-14 940.
（收稿日期：2017-09-12） （本文编辑：董悦）