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【摘要】 目的 探讨p63蛋白和生存survivin蛋白在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及临床意义。方法 采用免疫组化染色法检测p63蛋白、survivin蛋白及Ki-67在52例淋巴瘤(DLBCL)患者和10例反应性增生淋巴结石蜡标本中的表达。结果 p63和survivin在DLBCL中表达阳性率分别为63.5%和76.9%。p63在反应性增生淋巴结呈阴性表达,survivin在反应性增生淋巴结中阳性率为20%,p63和survivin的表达在两组之间差异有统计学意义(P<0.05)。在DLBCL中p63、survivin表达之间有相关性,二者的表达与Ki-67增值指数有相关性。p63、survivin阳性组复发率分别为68.0%和71.4%高于阴性组22.2%和30.8%。结论 P63和survivin在DLBCL中异常表达,与DLBCL的增殖有关,二者表达是临床治疗和预后的不利因素。
【关键词】
弥漫大B细胞淋巴瘤;p63;生存蛋白;Ki-67
Expression and clinical significance of survivin and p63 in diffuse large B-cell lymphoma
YI Fan-fan,LIU Si-guan,CHENG Wen-wei.
Department of Emergency, Zaozhuang Municipal Hospital, Shandong,277100,China
【Abstract】 Objective To investigate the expression and significance ofp63 and survivin in diffuse large B-cell lymphoma.Methods Immunohistochemical staining was used to detect the expression of p63,survivin and Ki-67 in the lymphnode tissues from DLBCL patients and lymph node reactive proliferation.Results The positive expression rate of p63 and survivin in DLBCL patients was 63.5% and 76.9% respectively. p63 was not expressed in lymph node reative proliferation. The positive expression rate of survivin in lymph node reative proliferation was 20%.The expression rates of survivin and p63 between two groups were significant difference.The expressions of p63 and survivin had relationships with Ki-67 LI. The relapse rate of groups with positive expression of survivin and p63 were higher than that of the negative groups.Conclusion The expression p63 and Survivin in DLBCL were abnormal andpoor factors of therapy and prognosis.P63 and survivin may accelerate the proliferation of DLBCL.
【Key words】 Diffuse large B-cell lymphom; survivin; p63;Ki-67
DOI:10.3760/cma.j.issn 1673-8799.2010.11.48
作者单位:277100
山东省枣庄市立医院急诊科
生存蛋白(survivin)是凋亡抑制蛋白(inhibitors of apoptosis proteins,IAP)家族中结构独特的新成员,与其家族其他成员不同, survivin蛋白在正常组织中不表达,而在所有被研究的肿瘤组织中呈阳性表达[1]。p63是p53基因家族的一员,目前研究证实其与组织发育密切相关,并可促进肿瘤的生长[2]。我们应用免疫组织化学方法检测弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL) survivin、p63及Ki-67 的表达,以探讨p63和survivin在DLBCL中表达与治疗效果的关系。
1 材料和方法
1.1 入组条件 初治DLBCL患者,均有明确病理诊断,且通过手术或影像学检查确定肿瘤侵犯部位;采用Ann Arbor分期系统,所有入选病例均接受4个疗程以上的联合化疗CHOP方案,加或不加放疗;登记临床资料,包括性别、年龄、病理类型、分期、B 症状、PS状态、乳酸脱氢酶(LDH)、接受治疗情况及疗效。
1.2 临床资料 52例DLBCL病例标本来源于2002年1月至2007年2月间枣庄市立医院及山东省立医院住院患者,男28例,女24例,发病年龄在19~78岁,平均64岁。Ⅰ期10例、Ⅱ期11例、Ⅲ19例、Ⅳ期12例,有B 症状者26例。疗效评价参照WHO 标准分为完全缓解(CR )、部分缓解(PR )、疾病稳定(SD)、疾病进展(PD)。另取10例淋巴结反应性增生标本作为对照。
1.3 免疫组化染色 采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶(SP)法,兔抗人survivin多克隆抗体、鼠抗人p63及Ki-67单克隆抗体和SP免疫组化试剂盒等均购于福州迈新生物技术有限公司,工作浓度为1∶100。将已知阳性切片作为阳性对照,用磷酸盐缓冲液代替一抗,作为阴性对照。
1.4 结果判断 survivin 呈胞浆着色,p63呈胞核着色,二者染色结果判定方法为:高倍视野下计数1000个以上肿瘤细胞中的阳性细胞所占的百分比,阳性细胞<5%为阴性(-);阳性细胞在5%～24%为(+);阳性细胞在25%～49%为(++);阳性细胞≥50%为(+++)。
Ki-67 阳性染色定位于细胞核,以细胞核染成黄色或棕黄色者为阳性细胞标志。随机选择20个视野,高倍镜下计数500～1000个细胞中的阳性细胞,以百分数表示Ki-67增殖指数(LI)。
1.5 统计学分析 应用SPSS13.0软件进行统计分析,计数资料用χ2检验,计量资料用t检验。
2 结果
2.1 survivin、p63在淋巴结反应性增生中的表达 在10例反应性增生淋巴结中p63为阴性表达,survivin表达阳性率为20%(2/10),且均为低表达(阳性细胞≤30%)。survivin表达于淋巴细胞生发中心细胞,而套区和副皮质区未见阳性细胞。p63和survivin的表达在DLBCL和反应性增生淋巴结之间差异有统计学意义(χ2=11.138,P<0.01;χ2=18.448,P<0.01)(见表1)。
2.2 DLBCL中survivin和p63表达与Ki-67的关系 在52例DLBCL中survivin阳性40例(76.9%),p63阳性33例(63.5%)。survivin与p63的表达均与Ki-67 LI显著相关。survivin阳性组与阴性组Ki-67LI分别为(50.4±10.8)和(24.6±8.8),阳性组Ki-67 LI显著高于阴性组(t=2.134, P<0.05)。p63阳性组与阴性组Ki-67 LI分别为(51.5±10.7)和(25.0±9.2),两组差异有显著性(t=2.386,P<0.05)。
survivin表达与p63表达呈显著正相关,p63在survivin阳性组表达率为70.0% (28/40例),在survivin阴性组表达率为41.6% (5/12例),两组差异有统计学意义(χ2=2.234, P<0.05)。
2.3 survivin、p63表达与疗效关系 在52例DLBLC患者中,治疗后CR34例(65.4%), PR9例(17.3%), SD 2例(3.8%), PD 7例(13.5%)。survivin阳性组的CR率低于阴性组,差异无统计学意义(χ2=0.205,P>0.05);而survivin阳性组复发率高于阴性组,差异有统计学意义(χ2=7.790, P<0.05)。p63阳性组CR率低于阴性组,差异无统计学意义(χ2=1.874, P>0.05);p63阳性组复发率高于阴性组,差异有统计学意义
(χ2=3.861, P<0.05)。结果见表2。
3 讨论
survivin是IAP家族最小的成员,直接作用于caspase-3 和caspase-7抑制细胞凋亡。survivin在胚胎组织、转化细胞及多种肿瘤组织中表达,而在正常成人组织不表达或低表达,在基因诊断和靶向治疗中具有较大的研究价值。我们应用免疫组化法在10份反应性增生淋巴结标本中survivin阳性表达20%,而在52例DLBCL中的表达率76.9%。两组之间差异有统计学意义,与以前的报道一致[3]。提示survivin 通过抑制凋亡在DLBCL的发生、发展过程中起着重要作用。我们在进一步分析survivin表达与疗效关系时发现, survivin阳性患者CR率较低,复发率显著高于阴性者,阳性者的生存期短于阴性组,国外有类似报道[4],提示survivin表达是DLBCL临床治疗和预后的不利因素。
p63作为p53基因家族的一员,其基因定位于染色体3q27-29区,包含15个外显子,有两种亚型:TAp63和ΔNp63;两者在功能上有明显差异,TAp63表达水平升高可以促进细胞凋亡,而ΔNp63的过度表达则可抑制细胞凋亡,具有癌基因功能[5]。本研究发现,p63在DLBCL阳性率为63.5%,与对照组之间差异有显著性,提示p63在DLBCL的发生发展中起癌基因作用。现已在胃癌、乳腺癌的多药耐药研究证实,p63过表达与耐药表型密切相关[6]。本研究发现,p63阳性组CR率较阴性组低,阳性组复发率显著高于阴性者,提示p63表达可能影响肿瘤的化疗效果。Park[7]等对48例DLBCL患者进行生存分析,中位观察时间为27个月, p63过表达(>30%)的患者生存率差(P=0.0228)。类似报道还有,Fukshima N[8]等研究发现在非生发中心组DLBCL中,p63阳性的患者生存率差,提示p63表达可能是临床治疗和预后的不利因素。
Ki-67 是评估肿瘤细胞增殖活性的良好指标,Ki-67 表达阳性说明该细胞处于增殖旺盛状态,高表达与肿瘤高恶性度、不良预后、癌转移等密切相关。本研究发现在DLBCL中survivin和p63 表达与Ki-67LI有相关性,说明survivin、p63 表达在DLBCL发病中可能有协同作用并与肿瘤细胞恶性增生有关。据此推测,对于survivin和p63阳性的患者,可及早使用高剂量强度化疗或骨髓移植等更为强烈的治疗方式,将有助于提高临床疗效,改善预后。
参考文献
[1] Ambrosini G,Adida C,Altieri D. A novel anti-apoptosis gene,survivin,expressed in cancer and lymphoma. Nat Med,1997,3:917-921.
[2] Barbareschi M, Pecciarini L, Cangi MG, et al. p63, a p53 homologue,is a selective nuclear marker of myoepithelial cell of the human breast. Am J Surg Pathol,2001,25 (8):1054-1060.
[3] 顾霞,林汉良.不同类型淋巴瘤survivin的表达及意义.癌症,2004,23(6):655-661.
[4] Adida C, Haioun C, Gaulard P, et al. Prognostic significance of survivin expression in diffuse large B-cell lymphomas.Blood,2000,96:1921-1925.
[5] Dohn M,Zhang S,Chen X,et al. p63alpha and Delta Np63alpha can induce cell cycle arrest and apoptosis and differentially regulate p53 target genes. Oncogene, 2001, 20:3193-3205.
[6] Park BJ,Lee SJ,Kim JI,et al.Transcrioptional regulators of the human multi-drug resistance gene:recent viewsl.Biochem Pharmacol, 2002,64: 943-948.
[7] Chan-Kum Park,Young-Ha Oh.Expression of p63 in reactive hyperplasis and m alignant lymphomas.J Korean Med Sci,2005,20:752-758.
[8] Fukushima N,Satoh T,Sueoka N,et al.Clinico-pathological character- ristics of p63 expression in B-cell lymphoma.Cancer Sci,2006,97:1050-1055.
【关键词】
弥漫大B细胞淋巴瘤;p63;生存蛋白;Ki-67
Expression and clinical significance of survivin and p63 in diffuse large B-cell lymphoma
YI Fan-fan,LIU Si-guan,CHENG Wen-wei.
Department of Emergency, Zaozhuang Municipal Hospital, Shandong,277100,China
【Abstract】 Objective To investigate the expression and significance ofp63 and survivin in diffuse large B-cell lymphoma.Methods Immunohistochemical staining was used to detect the expression of p63,survivin and Ki-67 in the lymphnode tissues from DLBCL patients and lymph node reactive proliferation.Results The positive expression rate of p63 and survivin in DLBCL patients was 63.5% and 76.9% respectively. p63 was not expressed in lymph node reative proliferation. The positive expression rate of survivin in lymph node reative proliferation was 20%.The expression rates of survivin and p63 between two groups were significant difference.The expressions of p63 and survivin had relationships with Ki-67 LI. The relapse rate of groups with positive expression of survivin and p63 were higher than that of the negative groups.Conclusion The expression p63 and Survivin in DLBCL were abnormal andpoor factors of therapy and prognosis.P63 and survivin may accelerate the proliferation of DLBCL.
【Key words】 Diffuse large B-cell lymphom; survivin; p63;Ki-67
DOI:10.3760/cma.j.issn 1673-8799.2010.11.48
作者单位:277100
山东省枣庄市立医院急诊科
生存蛋白(survivin)是凋亡抑制蛋白(inhibitors of apoptosis proteins,IAP)家族中结构独特的新成员,与其家族其他成员不同, survivin蛋白在正常组织中不表达,而在所有被研究的肿瘤组织中呈阳性表达[1]。p63是p53基因家族的一员,目前研究证实其与组织发育密切相关,并可促进肿瘤的生长[2]。我们应用免疫组织化学方法检测弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL) survivin、p63及Ki-67 的表达,以探讨p63和survivin在DLBCL中表达与治疗效果的关系。
1 材料和方法
1.1 入组条件 初治DLBCL患者,均有明确病理诊断,且通过手术或影像学检查确定肿瘤侵犯部位;采用Ann Arbor分期系统,所有入选病例均接受4个疗程以上的联合化疗CHOP方案,加或不加放疗;登记临床资料,包括性别、年龄、病理类型、分期、B 症状、PS状态、乳酸脱氢酶(LDH)、接受治疗情况及疗效。
1.2 临床资料 52例DLBCL病例标本来源于2002年1月至2007年2月间枣庄市立医院及山东省立医院住院患者,男28例,女24例,发病年龄在19~78岁,平均64岁。Ⅰ期10例、Ⅱ期11例、Ⅲ19例、Ⅳ期12例,有B 症状者26例。疗效评价参照WHO 标准分为完全缓解(CR )、部分缓解(PR )、疾病稳定(SD)、疾病进展(PD)。另取10例淋巴结反应性增生标本作为对照。
1.3 免疫组化染色 采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶(SP)法,兔抗人survivin多克隆抗体、鼠抗人p63及Ki-67单克隆抗体和SP免疫组化试剂盒等均购于福州迈新生物技术有限公司,工作浓度为1∶100。将已知阳性切片作为阳性对照,用磷酸盐缓冲液代替一抗,作为阴性对照。
1.4 结果判断 survivin 呈胞浆着色,p63呈胞核着色,二者染色结果判定方法为:高倍视野下计数1000个以上肿瘤细胞中的阳性细胞所占的百分比,阳性细胞<5%为阴性(-);阳性细胞在5%～24%为(+);阳性细胞在25%～49%为(++);阳性细胞≥50%为(+++)。
Ki-67 阳性染色定位于细胞核,以细胞核染成黄色或棕黄色者为阳性细胞标志。随机选择20个视野,高倍镜下计数500～1000个细胞中的阳性细胞,以百分数表示Ki-67增殖指数(LI)。
1.5 统计学分析 应用SPSS13.0软件进行统计分析,计数资料用χ2检验,计量资料用t检验。
2 结果
2.1 survivin、p63在淋巴结反应性增生中的表达 在10例反应性增生淋巴结中p63为阴性表达,survivin表达阳性率为20%(2/10),且均为低表达(阳性细胞≤30%)。survivin表达于淋巴细胞生发中心细胞,而套区和副皮质区未见阳性细胞。p63和survivin的表达在DLBCL和反应性增生淋巴结之间差异有统计学意义(χ2=11.138,P<0.01;χ2=18.448,P<0.01)(见表1)。
2.2 DLBCL中survivin和p63表达与Ki-67的关系 在52例DLBCL中survivin阳性40例(76.9%),p63阳性33例(63.5%)。survivin与p63的表达均与Ki-67 LI显著相关。survivin阳性组与阴性组Ki-67LI分别为(50.4±10.8)和(24.6±8.8),阳性组Ki-67 LI显著高于阴性组(t=2.134, P<0.05)。p63阳性组与阴性组Ki-67 LI分别为(51.5±10.7)和(25.0±9.2),两组差异有显著性(t=2.386,P<0.05)。
survivin表达与p63表达呈显著正相关,p63在survivin阳性组表达率为70.0% (28/40例),在survivin阴性组表达率为41.6% (5/12例),两组差异有统计学意义(χ2=2.234, P<0.05)。
2.3 survivin、p63表达与疗效关系 在52例DLBLC患者中,治疗后CR34例(65.4%), PR9例(17.3%), SD 2例(3.8%), PD 7例(13.5%)。survivin阳性组的CR率低于阴性组,差异无统计学意义(χ2=0.205,P>0.05);而survivin阳性组复发率高于阴性组,差异有统计学意义(χ2=7.790, P<0.05)。p63阳性组CR率低于阴性组,差异无统计学意义(χ2=1.874, P>0.05);p63阳性组复发率高于阴性组,差异有统计学意义
(χ2=3.861, P<0.05)。结果见表2。
3 讨论
survivin是IAP家族最小的成员,直接作用于caspase-3 和caspase-7抑制细胞凋亡。survivin在胚胎组织、转化细胞及多种肿瘤组织中表达,而在正常成人组织不表达或低表达,在基因诊断和靶向治疗中具有较大的研究价值。我们应用免疫组化法在10份反应性增生淋巴结标本中survivin阳性表达20%,而在52例DLBCL中的表达率76.9%。两组之间差异有统计学意义,与以前的报道一致[3]。提示survivin 通过抑制凋亡在DLBCL的发生、发展过程中起着重要作用。我们在进一步分析survivin表达与疗效关系时发现, survivin阳性患者CR率较低,复发率显著高于阴性者,阳性者的生存期短于阴性组,国外有类似报道[4],提示survivin表达是DLBCL临床治疗和预后的不利因素。
p63作为p53基因家族的一员,其基因定位于染色体3q27-29区,包含15个外显子,有两种亚型:TAp63和ΔNp63;两者在功能上有明显差异,TAp63表达水平升高可以促进细胞凋亡,而ΔNp63的过度表达则可抑制细胞凋亡,具有癌基因功能[5]。本研究发现,p63在DLBCL阳性率为63.5%,与对照组之间差异有显著性,提示p63在DLBCL的发生发展中起癌基因作用。现已在胃癌、乳腺癌的多药耐药研究证实,p63过表达与耐药表型密切相关[6]。本研究发现,p63阳性组CR率较阴性组低,阳性组复发率显著高于阴性者,提示p63表达可能影响肿瘤的化疗效果。Park[7]等对48例DLBCL患者进行生存分析,中位观察时间为27个月, p63过表达(>30%)的患者生存率差(P=0.0228)。类似报道还有,Fukshima N[8]等研究发现在非生发中心组DLBCL中,p63阳性的患者生存率差,提示p63表达可能是临床治疗和预后的不利因素。
Ki-67 是评估肿瘤细胞增殖活性的良好指标,Ki-67 表达阳性说明该细胞处于增殖旺盛状态,高表达与肿瘤高恶性度、不良预后、癌转移等密切相关。本研究发现在DLBCL中survivin和p63 表达与Ki-67LI有相关性,说明survivin、p63 表达在DLBCL发病中可能有协同作用并与肿瘤细胞恶性增生有关。据此推测,对于survivin和p63阳性的患者,可及早使用高剂量强度化疗或骨髓移植等更为强烈的治疗方式,将有助于提高临床疗效,改善预后。
参考文献
[1] Ambrosini G,Adida C,Altieri D. A novel anti-apoptosis gene,survivin,expressed in cancer and lymphoma. Nat Med,1997,3:917-921.
[2] Barbareschi M, Pecciarini L, Cangi MG, et al. p63, a p53 homologue,is a selective nuclear marker of myoepithelial cell of the human breast. Am J Surg Pathol,2001,25 (8):1054-1060.
[3] 顾霞,林汉良.不同类型淋巴瘤survivin的表达及意义.癌症,2004,23(6):655-661.
[4] Adida C, Haioun C, Gaulard P, et al. Prognostic significance of survivin expression in diffuse large B-cell lymphomas.Blood,2000,96:1921-1925.
[5] Dohn M,Zhang S,Chen X,et al. p63alpha and Delta Np63alpha can induce cell cycle arrest and apoptosis and differentially regulate p53 target genes. Oncogene, 2001, 20:3193-3205.
[6] Park BJ,Lee SJ,Kim JI,et al.Transcrioptional regulators of the human multi-drug resistance gene:recent viewsl.Biochem Pharmacol, 2002,64: 943-948.
[7] Chan-Kum Park,Young-Ha Oh.Expression of p63 in reactive hyperplasis and m alignant lymphomas.J Korean Med Sci,2005,20:752-758.
[8] Fukushima N,Satoh T,Sueoka N,et al.Clinico-pathological character- ristics of p63 expression in B-cell lymphoma.Cancer Sci,2006,97:1050-1055.