【摘 要】
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目的 探讨mTOR信号通路在Omega-3多不饱和脂肪酸饮食干预四氯化碳(CC14)诱导小鼠肝纤维化进程中的作用及其机制.方法 将C57BL/6小鼠随机分为对照组,4周模型组,8周模型组及治疗组,对照组经腹腔注射玉米油;模型组及治疗组经腹腔注射含20％ CCl4的玉米油溶液,5 mL/kg,每周2次,除4周模型组注射4周外,其余3组持续注射8周;治疗组在造模的同时,从第4周开始进行二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)/二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,
【机 构】
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广东工业大学生物医药学院,广东广州510006;温州医科大学眼视光学院生物医学工程学院,浙江温州325035
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目的 探讨mTOR信号通路在Omega-3多不饱和脂肪酸饮食干预四氯化碳(CC14)诱导小鼠肝纤维化进程中的作用及其机制.方法 将C57BL/6小鼠随机分为对照组,4周模型组,8周模型组及治疗组,对照组经腹腔注射玉米油;模型组及治疗组经腹腔注射含20％ CCl4的玉米油溶液,5 mL/kg,每周2次,除4周模型组注射4周外,其余3组持续注射8周;治疗组在造模的同时,从第4周开始进行二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)/二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)灌胃治疗,4 g/kg,每日1次,对照组及8周模型组灌胃等剂量生理盐水.在造模完成后24h内剖解,观察肝脏大体形态;小鼠肝组织包埋切片,HE、Masson三色及天狼星红染色评估肝组织病理变化及纤维化程度;免疫组织化学染色分析肝组织中肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)活化标志蛋白(α-SMA)、抗凋亡蛋白(Bcl-2、Bcl-xL)、细胞增殖核抗原蛋白(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达水平;Western blot分析促纤维化蛋白(Collagen 1A1、Fibronectin及α-SMA)的表达水平,同时检测mTOR信号通路中mTOR及S6蛋白的磷酸化水平.结果 与8周模型组比较,治疗组小鼠肝脏形态有显著改善,但肝组织表面仍有细小颗粒;小鼠肝组织中炎症细胞浸润、肝细胞坏死及胶原沉积显著减少,其炎症及纤维化程度接近4周模型组.经免疫组织化学分析,肝组织中α-SMA蛋白表达水平显著减少(P＜0.01),Bcl-2、Bcl-xL及PCNA蛋白表达水平均显著增加(P均＜0.01);经Western blot分析,α-SMA、Collagen1A1、Fibronectin蛋白表达水平均显著减少(P均＜0.01);mTOR及S6蛋白的磷酸化水平显著下降(P均＜0.01).结论 Omega-3多不饱和脂肪酸饮食干预能抑制CCl4诱导的小鼠肝纤维化,其作用机制可能与抑制mTOR信号通路有关.
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