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【目的】明确生物农药短稳杆菌对草地贪夜蛾的杀虫活性及其体内解毒酶活性的影响，为草地贪夜蛾的高效绿色防控提供理论依据。【方法】采用叶片浸渍法测定短稳杆菌对草地贪夜蛾1、2和3龄幼虫的室内杀虫活性；通过喷雾法测定短稳杆菌对草地贪夜蛾的田间控制效果；以短稳杆菌亚致死剂量处理草地贪夜蛾幼虫，利用酶标仪检测幼虫体内解毒酶（谷胱甘肽S-转移酶、羧酸酯酶）和乙酰胆碱酯酶活性的变化。【结果】室内杀虫活性测定结果显示，短稳杆菌对草地贪夜蛾幼虫具有较强的毒杀作用，取食经1.00×10~7孢子/mL短稳杆菌处理的玉米叶片72 h后，1、2和3龄幼虫的校正死亡率分别达86.21%、83.05%和58.33%。玉米田施用100亿孢子/mL短稳杆菌悬浮剂800和1000倍液7 d后，对草地贪夜蛾的防治效果分别为95.84%和93.78%，显著高于0.5%苦参碱水剂800倍液处理（P＜0.05），高于200 g/L氯虫苯甲酰胺悬浮剂2000倍液处理但差异不显著（P＞0.05）。亚致死剂量短稳杆菌(LC20)处理后，草地贪夜蛾幼虫体内谷胱甘肽S-转移酶、羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶活性均有不同程度下降。【结论】短稳杆菌对草地贪夜蛾低龄幼虫具有较好的室内杀虫活性和田间防治效，可作为防治草地贪夜蛾有效的生物农药使用。在玉米田草地贪夜蛾低龄幼虫盛发期，使用100亿孢子/mL短稳杆菌悬浮剂进行防治时，建议使用800～1000倍液喷施。