【摘 要】
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目的 构建包含LMO3 ( LIM-only 3,LMO3)全长基因的逆转录病毒表达载体,感染人神经母细胞瘤SK-N-AS,检测LMO3对SK-N-AS细胞增殖的影响.方法 将质粒pEGFP-C1-LMO3经EcoRⅠ和Bam
【机 构】
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兰州军区兰州总医院医学实验中心,兰州大学第二医院检验中心
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目的 构建包含LMO3 ( LIM-only 3,LMO3)全长基因的逆转录病毒表达载体,感染人神经母细胞瘤SK-N-AS,检测LMO3对SK-N-AS细胞增殖的影响.方法 将质粒pEGFP-C1-LMO3经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN,构建重组逆转录病毒表达载体pLXSN-LMO3,导入包装细胞pA317,获得逆转录病毒颗粒,感染SK-N-AS细胞,用RT-PCR及Western 印迹鉴定,检测LMO3感染后细胞的增殖及细胞周期分布情况.结果 获得了能正确表达LMO3基因的重组逆转录病毒表达载体pLXSN-LMO3;LMO3基因被逆转录病毒成功导入SK-N-AS细胞后,与对照组细胞相比,LMO3感染组G0/G1期细胞减少,S期细胞增加,感染48 h后,LMO3感染组细胞的增殖能力显著高于空载体对照组及SK-N-AS组(P＜0.05).结论 成功构建了LMO3基因的逆转录病毒表达载体,LMO3可以通过促进SK-N-AS细胞由G0/G1期进入S期,从而促进细胞的增殖.
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