【摘 要】
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目的 探究二甲双胍（Met）通过腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）/信号转导及转录激活因子3（STAT3）信号通路调控巨噬细胞表型对小鼠动脉粥样硬化（As）形成的影响。方法 体外培养RAW264.7巨噬细胞，使用脂多糖促进巨噬细胞分化，同时使用Met刺激细胞。流式细胞术检测不同表型（CD86、CD206）巨噬细胞比例。Western blot检测相关信号通路蛋白诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、精氨酸酶
【机 构】
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广州医科大学附属第三医院心血管内科
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目（81870320）； 广州市卫健委特色技术项目（TS20190337）；
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目的 探究二甲双胍（Met）通过腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）/信号转导及转录激活因子3（STAT3）信号通路调控巨噬细胞表型对小鼠动脉粥样硬化（As）形成的影响。方法 体外培养RAW264.7巨噬细胞，使用脂多糖促进巨噬细胞分化，同时使用Met刺激细胞。流式细胞术检测不同表型（CD86、CD206）巨噬细胞比例。Western blot检测相关信号通路蛋白诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、精氨酸酶1（Arg-1）、AMPK、磷酸化AMPK（pAMPK）、STAT3、磷酸化STAT3（pSTAT3）蛋白表达水平。高脂饲料喂养ApoE-/-小鼠构建As模型。实验组（Met组）小鼠予Met灌胃干预，对照组（CTL组）小鼠给予同体积生理盐水灌胃干预。3个月后，提取小鼠大动脉全长（头臂干至双侧髂动脉）及主动脉根部，分别行油红O染色和免疫荧光染色，评价主动脉脂质沉积情况和脂质斑块内巨噬细胞不同表型比例。提取大动脉蛋白，Western blot验证相关信号通路的AMPK、pAMPK、STAT3、pSTAT3蛋白表达水平。结果 细胞实验表明，Met刺激后M1巨噬细胞比例明显减少，M2巨噬细胞比例明显增加（P<0.05）,AMPK活性明显增加，而STAT3活性明显下降。动物实验表明，在造模3个月后，油红O染色示Met组小鼠大动脉全长和主动脉瓣膜处脂质沉积均较CTL组明显减少（P<0.05）;免疫荧光染色示Met组脂质斑块内M1巨噬细胞比例较CTL组明显减少，而M2巨噬细胞比例较CTL组明显增多（P<0.05）。Western blot实验显示，与CTL组相比，Met组AMPK活性明显增加，而STAT3活性明显降低（P<0.05）。结论 Met通过激活AMPK抑制STAT3活性，调控斑块内巨噬细胞表型分化，抑制小鼠As形成。
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