为了向转基因牛提供过表达 A-FABP 的供核细胞,本研究从 NCBI 中查找牛脂肪型脂肪酸结合蛋白(Albert, A-FABP)基因全长 cDNA 序列,通过简并密码子的方法设计特异性引物.A-FABP 基因通过公司合成,与 pEGFP-C1载体连接形成重组质粒 pEGFP-C1-A-FABP.分离获得3株秦川牛胎儿成纤维细胞(battle embryonic fibroblast, BEF),分别用 DMEM 和 D/F12进行培养,随机选择一株细胞优化外源基因转染条件.用优化的条件转染这3株细胞,800滋g/mL G-418进行筛选,挑取单克隆,获得稳定转染 A-FABP 的细胞株.PCR 和 RT-PCR 检测细胞 A-FABP 基因的表达.结果显示,D/F12比 DMEM 能促进细胞的增殖(p<0.05);细胞在高糖 DMEM 的转染效率显著高于 D/F12(p<0.05);2株胎儿成纤维细胞(1雄1雌)获得5株稳定表达的细胞,其中4株来源于雌性细胞.结果证明细胞培养基、性别和细胞系影响牛 A-FABP 转基因效率.