【摘 要】
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目的 通过实验确证轮状病毒(Rotavirus,RV)非结构蛋白1(NSP1)的泛素连接酶活性,为阐明其在RV复制和致病机制中的作用提供线索.方法 将NSP1基因及其RING结构域缺失突变体构建
【机 构】
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中国医学科学院病原生物学研究所病毒基因工程国家重点实验室,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
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目的 通过实验确证轮状病毒(Rotavirus,RV)非结构蛋白1(NSP1)的泛素连接酶活性,为阐明其在RV复制和致病机制中的作用提供线索.方法 将NSP1基因及其RING结构域缺失突变体构建到pEGFP-C1质粒上,与表达泛素的质粒pBlue-Script-HA-Ubiquitin共转染人胚肾293FT细胞,用免疫荧光和Western blot方法 确定蛋白的表达,并通过免疫共沉淀方法 分析蛋白的泛素化.结果 NSP1蛋白的表达可增加细胞内的泛素化水平,并且自身也发生泛素化.结论 NSP1蛋白具有E3泛素连接酶活性.可能在泛素化调控机制中发挥作用.
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