【摘 要】
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以错配反应与正常反应之间的△Ct值为指示,研究不同碱基错配类型、位置与个数条件下引物3’端与模板之间非特异性扩增的发生规律,并构建△Ct值的二次多项式回归模型.结果表明
【机 构】
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中国肉类食品综合研究中心,肉类加工技术北京市重点实验室,北京 100068
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以错配反应与正常反应之间的△Ct值为指示,研究不同碱基错配类型、位置与个数条件下引物3’端与模板之间非特异性扩增的发生规律,并构建△Ct值的二次多项式回归模型.结果表明,碱基错配种类、位置、个数对实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR)的非特异性扩增都有显著影响,并呈现出较强的规律性.碱基类型上,研究的各个位置上异型错配较易发生非特异性扩增,而同型错配则较难发生,并且两种错配类型之间有显著性差异(P＜0.05);错配位置上,相同条件下引物3’端第1位碱基错配对△Ct值影响最大,错配位置远离3’端时对△Ct值的影响逐渐减小,非特异性扩增也更容易发生;错配个数上,随着错配碱基个数的增加对△Ct值得影响程度不断增大,非特异性扩增较难发生.构建△Ct值预测模型R2达到0.837 1,根据此模型可以预测出不同位置、不同错配类型条件下△Ct值,从而可以判断RT-qPCR非特异性扩增的发生的难易程度.
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