论文部分内容阅读
论文摘要：目的为充分利用芹菜食物资源，避免资源的浪费，探讨芹菜总黄酮的提取及鉴别方法。方法采用超声波乙醇浸提法从芹菜中提取黄酮类物质，对所提取的黄酮类物质进行验证，并用分光光度法测定含量。结果测得样品中总黄酮的含量C=0.2126 mg/ml，回收率为100.3%，其纯度和产率均较高。结论该方法采用全物理过程，无任何污染，是提取芹菜黄酮类物质的有效途径。
主题词： 芹菜 提取 总黄酮
中图分类号：P746.2+2
芹菜Apium graveolens L.属伞形花科一年生或二年生草本植物，异名药芹、旱芹。芹菜味辛、甘，性凉，营养丰富。已有研究证实，芹菜含有丰富的黄酮类化合物、多不饱和脂肪酸、矿物元素、丁基苯酞类、萜类、香豆素衍生物、叶绿素、氨基酸与维生素、膳食纤维等，其中，黄酮类化合物主要成分为水蓼素及7-甲基水蓼素，医学证明，这2种黄酮类化合物是 治疗 高血压的有效成分。在药理上，芹菜还具有降压、安神、降血糖、血脂、软化血管、增强免疫力、增进食欲和健胃等药理作用。还可作为神经衰弱、小便热涩不利、月经不调等症的食疗。芹菜中含有大量膳食纤维素，经常食用有促进肠蠕动、防治便秘以及预防大肠癌等。
有文献报道芹菜中总黄酮的提取方法采用乙醇提取，但是，这种方法的提取效率仍然较低。近年来，超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究已有报道，表明其具有能耗低、效率高、不破坏有效成分的特点。很多研究表明，利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响。但超声技术应用于提取芹菜中黄酮类物质的研究尚未见报道，本文报道用超声波提取芹菜总黄酮及鉴别。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
KQ5200DB型数控超声波清洗器（超声工作频率40kHz、昆山市超声仪器有限公司）；UV755B紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；ZF-I型三用紫外分析仪（上海顾村光电仪器厂）；SHBIII循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。
1.2 试剂
95%乙醇AR；亚硝酸钠AR；硝酸铝AR；氢氧化钠AR；三氯化铝AR；盐酸AR；氨水AR；冰醋酸AR；醋酸乙酯AR；芦丁标准品（ 中国 药品生物制品检定所）；新鲜芹菜买自百色市农贸市场。
2 方法与结果
2.1 总黄酮成分提取
取新鲜芹菜，烘干，粉碎。称取芹菜粉末约6 g，加80 ml 95%乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤。滤渣再加80 ml 95 %乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤，合并两次滤液，减压回收乙醇至滤液仅剩5～7 ml为止，放置100 ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，得样品液。
2.2 测定方法依据
以芦丁为对照品测定芹菜中总黄酮的含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。
2.3 定量实验-总黄酮的含量测定
2.3.1 波长的选择取样品液适量，在0.30 ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420～700 nm波长范围测定络合物的吸光度，络合物于510 nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。
2.3.2 标准曲线的绘制分别精密吸取芦丁对照液（0.13 mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 ml于10.00 ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.30 ml，摇匀，静置6 min；再加10%硝酸铝溶液0.30 ml，摇匀，静置6 min；再加4%氢氧化钠溶液4.00 ml，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12 min，以试剂作空白参比液，于510 nm处测定吸光度。
2.3.3 提取物含量的测定精密吸取样品液0.50 ml，置10.00 ml容量瓶，按标准曲线的制备方法测定其吸光度A=0.137，根据回归方程：A=3.619×103+12.34C， 计算 样品中总黄酮的含量C=0.216 2 mg/ml。
2.3.4 回收率实验
精密量取样品液1.00 ml，加入标准芦丁对照品1.00 ml（0.13 mg/ml），同前样品测定方法操作测定吸光度，求出回收率为100.3% 。
2.4 定性实验-总黄酮的鉴别
2.4.1 颜色反应紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上，在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。
浓氨水反应：取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏30 s，立即在紫外光下观察，呈极明显的黄褐色荧光斑点。
三氯化铝反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%三氯化铝乙醇溶液，吹干。在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈黄色荧光斑点。
乙酸镁反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%乙酸镁甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黄色斑点。
盐酸-镁粉反应：取乙醇提取液1 ml于试管中加镁粉，再加入浓盐酸数滴（1次加入），在泡沫处呈紫红色。
2.4.2 纸层析取样品溶液10 μl点在滤纸上。用正丁醇∶醋酸∶水=4∶1∶5（体积比）为展开剂，上行展开5 h，取出晾干。喷1%氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可见荧光斑点。
3 讨论
3.1 实验结果表明，本实验方法工艺简单，回收率为100.3%，利用本文所提供的超声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。超声波可以强化乙醇浸提法，达到省时、高效、节能的目的，此方法采用全物理过程，无任何污染，是一条理想的提取黄酮类物质的途径，具有广阔的应用前景。
3.2 黄酮类化合物是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分。在 自然 界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄（醇）、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等。天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能进入脂肪组织，进而体现出如下功能：消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其他脏器细胞的功能。
黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、 治疗 骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用。近年来，世界上掀起了植物药开发的热潮，植物药以其天然低毒的特点倍受青睐，而黄酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目，芹菜分布广泛，本文实验结果表明，芹菜中含有黄酮。因此，芹菜具有广泛开发和利用价值，值得综合利用加强资源开发。
参考文献：
1、赵进，超声波提取芹菜总黄酮及鉴别，论文网，2011.08
主题词： 芹菜 提取 总黄酮
中图分类号：P746.2+2
芹菜Apium graveolens L.属伞形花科一年生或二年生草本植物，异名药芹、旱芹。芹菜味辛、甘，性凉，营养丰富。已有研究证实，芹菜含有丰富的黄酮类化合物、多不饱和脂肪酸、矿物元素、丁基苯酞类、萜类、香豆素衍生物、叶绿素、氨基酸与维生素、膳食纤维等，其中，黄酮类化合物主要成分为水蓼素及7-甲基水蓼素，医学证明，这2种黄酮类化合物是 治疗 高血压的有效成分。在药理上，芹菜还具有降压、安神、降血糖、血脂、软化血管、增强免疫力、增进食欲和健胃等药理作用。还可作为神经衰弱、小便热涩不利、月经不调等症的食疗。芹菜中含有大量膳食纤维素，经常食用有促进肠蠕动、防治便秘以及预防大肠癌等。
有文献报道芹菜中总黄酮的提取方法采用乙醇提取，但是，这种方法的提取效率仍然较低。近年来，超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究已有报道，表明其具有能耗低、效率高、不破坏有效成分的特点。很多研究表明，利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响。但超声技术应用于提取芹菜中黄酮类物质的研究尚未见报道，本文报道用超声波提取芹菜总黄酮及鉴别。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
KQ5200DB型数控超声波清洗器（超声工作频率40kHz、昆山市超声仪器有限公司）；UV755B紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；ZF-I型三用紫外分析仪（上海顾村光电仪器厂）；SHBIII循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。
1.2 试剂
95%乙醇AR；亚硝酸钠AR；硝酸铝AR；氢氧化钠AR；三氯化铝AR；盐酸AR；氨水AR；冰醋酸AR；醋酸乙酯AR；芦丁标准品（ 中国 药品生物制品检定所）；新鲜芹菜买自百色市农贸市场。
2 方法与结果
2.1 总黄酮成分提取
取新鲜芹菜，烘干，粉碎。称取芹菜粉末约6 g，加80 ml 95%乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤。滤渣再加80 ml 95 %乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤，合并两次滤液，减压回收乙醇至滤液仅剩5～7 ml为止，放置100 ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，得样品液。
2.2 测定方法依据
以芦丁为对照品测定芹菜中总黄酮的含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。
2.3 定量实验-总黄酮的含量测定
2.3.1 波长的选择取样品液适量，在0.30 ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420～700 nm波长范围测定络合物的吸光度，络合物于510 nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。
2.3.2 标准曲线的绘制分别精密吸取芦丁对照液（0.13 mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 ml于10.00 ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.30 ml，摇匀，静置6 min；再加10%硝酸铝溶液0.30 ml，摇匀，静置6 min；再加4%氢氧化钠溶液4.00 ml，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12 min，以试剂作空白参比液，于510 nm处测定吸光度。
2.3.3 提取物含量的测定精密吸取样品液0.50 ml，置10.00 ml容量瓶，按标准曲线的制备方法测定其吸光度A=0.137，根据回归方程：A=3.619×103+12.34C， 计算 样品中总黄酮的含量C=0.216 2 mg/ml。
2.3.4 回收率实验
精密量取样品液1.00 ml，加入标准芦丁对照品1.00 ml（0.13 mg/ml），同前样品测定方法操作测定吸光度，求出回收率为100.3% 。
2.4 定性实验-总黄酮的鉴别
2.4.1 颜色反应紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上，在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。
浓氨水反应：取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏30 s，立即在紫外光下观察，呈极明显的黄褐色荧光斑点。
三氯化铝反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%三氯化铝乙醇溶液，吹干。在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈黄色荧光斑点。
乙酸镁反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%乙酸镁甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黄色斑点。
盐酸-镁粉反应：取乙醇提取液1 ml于试管中加镁粉，再加入浓盐酸数滴（1次加入），在泡沫处呈紫红色。
2.4.2 纸层析取样品溶液10 μl点在滤纸上。用正丁醇∶醋酸∶水=4∶1∶5（体积比）为展开剂，上行展开5 h，取出晾干。喷1%氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可见荧光斑点。
3 讨论
3.1 实验结果表明，本实验方法工艺简单，回收率为100.3%，利用本文所提供的超声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。超声波可以强化乙醇浸提法，达到省时、高效、节能的目的，此方法采用全物理过程，无任何污染，是一条理想的提取黄酮类物质的途径，具有广阔的应用前景。
3.2 黄酮类化合物是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分。在 自然 界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄（醇）、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等。天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能进入脂肪组织，进而体现出如下功能：消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其他脏器细胞的功能。
黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、 治疗 骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用。近年来，世界上掀起了植物药开发的热潮，植物药以其天然低毒的特点倍受青睐，而黄酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目，芹菜分布广泛，本文实验结果表明，芹菜中含有黄酮。因此，芹菜具有广泛开发和利用价值，值得综合利用加强资源开发。
参考文献：
1、赵进，超声波提取芹菜总黄酮及鉴别，论文网，2011.08