【摘 要】
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目的:探究在低糖低氧状态下通过磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMP-dependent/activated protein kinase,AMPK)通路调控肉碱脂酰转移酶1c (camitine palmitoyltransferase 1c,CPT1c)
【机 构】
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海军军医大学附属长海医院普外科,上海,200433海军军医大学基础医学院生物化学教研室,上海,200433;
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目的:探究在低糖低氧状态下通过磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMP-dependent/activated protein kinase,AMPK)通路调控肉碱脂酰转移酶1c (camitine palmitoyltransferase 1c,CPT1c)的表达对甲状腺乳头状癌B-CPAP细胞增殖及凋亡的作用及其机制.方法:对正常条件和低糖低氧条件下培养的人甲状腺乳头状癌细胞B-CPAP,分别给予AMPK抑制剂CompoundC处理,使用Westem blotting检测AMPK、p-AMPK、过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferator-activated receptor α,PPARα)、CPT1c的表达,并利用CCK-8法及FACS检测各组细胞的增殖和凋亡情况.合成的PPARα-siRNA转染B-CPAP细胞以敲低PPARα,分别在正常和低糖低氧环境下培养,同样检测上述指标,以验证PPARα对CPT1c的调控作用.构建人CPT1c基因启动子荧光素酶报告质粒,利用免疫荧光法观察PPARα对CPT1c基因启动子荧光素酶活性的影响.结果:(1)低糖和低氧条件下培养的B-CPAP细胞中,AMPK、p-AMPK、PPARα、CPT1c表达均显著增加(均P＜0.05或P＜0.01),细胞增殖和凋亡率未有明显改变(均P＞0.05);(2)应用AMPK抑制剂CompoundC后,低糖低氧组p-AMPK、PPARα、CPT1c明显降低(P＜0.05或P＜0.01),细胞增殖抑制率及凋亡率显著升高(均P＜0.01),但升高幅度仍小于单独加抑制剂后高于正常对照的幅度(P＜0.05).(3)PPARα敲低后,正常条件下培养的肿瘤细胞的AMPK、p-AMPK、PPARα、CPT1c的表达显著减少(P＜0.05或P＜0.01),细胞增殖抑制率及凋亡率均显著升高(均P＜0.05);低糖低氧培养条件下,转染后细胞CPT1c表达显著降低(P＜0.05),细胞增殖抑制率及凋亡率有显著升高(均P＜0.05),但升高幅度仍低于转染后高于正常对照的幅度(P＜0.05).(4)转染过表达PPARα后,空载组双荧光比值与空白组无差异(P＞0.05),PPARα过表达组双荧光比显著增高(P＜0.05).结论:甲状腺乳头状癌B-CPAP细胞在低糖低氧状态下,AMPK通路能够通过上调PP ARα促进CPT1c的表达,从而抑制细胞凋亡和维持细胞增殖能力.
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