用P.pastoris表达L-阿拉伯糖异构酶及其酶活性分析

来源 :生物技术 | 被引量 : 0次 | 上传用户：qiufeng115

【摘要】

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目的:用毕赤酵母表达L-阿拉伯糖异构酶.方法:用PCR法扩增大肠杆菌的L-阿拉伯糖异构酶基因,构建含L-阿拉伯糖异构酶基因的毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K-ai.通过电转法将pPIC9

【作者】

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陈丽萍崔艳艳张爱联

【机构】

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海南大学农学院,海南海口,570228中国热带农业科学院热带生物技术研究所,农业部热带作物生物技术重点开放实验室,海南海口571101;

【出处】

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生物技术

【发表日期】

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2013年1期

【关键词】

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L-阿拉伯糖异构酶毕赤酵母基因表达酶活性 D-塔格糖

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目的:用毕赤酵母表达L-阿拉伯糖异构酶.方法:用PCR法扩增大肠杆菌的L-阿拉伯糖异构酶基因,构建含L-阿拉伯糖异构酶基因的毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K-ai.通过电转法将pPIC9K-ai转化毕赤酵母GS115基因组.先筛选出高G418抗性的克隆,然后再从高拷贝的克隆中筛选出高表达重组L-阿拉伯糖异构酶的重组子作为工程菌GS115(pPIC9K-ai).结果:在甲醇诱导下,摇瓶发酵GS115(pPIC9K-ai)3d,分泌表达L-阿拉伯糖异构酶32 mg/L.结论:毕赤酵母表达的L-阿拉伯糖异构酶具有转化D-半乳糖为D-塔格糖的生物活性.每升GS115(pPIC9K-ai)发酵液能转化D-半乳糖生成30 mgD-塔格糖.

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